EvaGreen™核酸染料是一种新型的的双链DNA结合荧光染料,是一种新一代用于实时定量PCR（qPCR）的DNA结合染料。该染料结构上由两个单体染料分子通过一个弹性臂连接成一个二聚体，在没有DNA存在时，该结构呈无荧光环状结构，一旦有DNA出现，则恢复随机形态并与DNA结合发出强烈的绿色荧光。与市场上其他荧光染料如SYBR Green I 相比，EvaGreen具有如下突出优点：1）高灵敏度：在推荐浓度下使用时可以获得比SYBR Green I 更强的PCR扩增信号。2）PCR抑制性小，非常适合多重PCR及HRM分析。过量染料形成二聚体，而不游离，使得EvaGreen对PCR的抑制远小于SYBR Green I。因此，使用EvaGreen进行的qPCR实验可以使用快速PCR步骤。同时，EveGreen在实验中可以使用较高的浓度，从而获得远强于SYBR Green I扩增信号。EvaGreen既可用于多重PCR，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲线分析(HRM)。3）高稳定性：在正常的储存、操作和PCR过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以**的储存在室温或冰箱里，也可以反复冻融。4）**性好：细胞膜穿透性测试表明，EvaGreen几乎不能穿透细胞膜，**性高。5）兼容性：和SYBR Green I 光谱相似，使用不同品牌qPCR仪器时不许改变光谱元件设置，也无需改变操作步骤，qPCR完成后，无需加入其它核酸染料便能直接在凝胶成像系统下观察分析。此外，EvaGreen是目前仅有的可以用于微滴式数字PCR系统的染料，在微流控PCR，恒温扩增，毛细管电泳，DNA定量以及细胞活力鉴定等领域也具有**的表现。本品以20×EvaGreen水溶液形式提供。
运输与保存方法
冰袋运输。4 ºC干燥避光保存，保质期12个月。
注意事项
1）做qPCR时注意设置阳性和阴性对照。
2）为了您的**和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
光学性质
激发波长= 500 nm
发射波长= 530nm
实验方法
PCR反应的配制（50uL）
试剂 用量 ddH2O 计算加水到终体积50uL Taq polymerase buffer without magnesium 5 uL 2mM的 dNTP 5 uL 50mM MgCl2 2.5uL 20 X EvaGreen 2.5uL Taq DNA polymerase 5U Each of primers 0.1-1 uM（终浓度）
1) 请根据不同的仪器类型，不加入或加入合适浓度的参比染料ROX。该体系需根据所使用的Taq酶的不同进行适当优化；
2）根据实验用量于冰上向无菌离心管中依次加入水，Taq polymerase buffer, dNTPs, MgCl2, EveGreen, Taq polymerase,
and primers等配制qPCR反应体系（1×Master mix）；
3）将1×Master mix 适量分装至无菌PCR管中，并加入DNA (50 ng/反应)；
4）按照仪器类型选择合适的扩增程序。