可的松 ELISA 试剂盒（化学发光）

1. 检测原理

本试剂盒采用**竞争性化学发光免疫分析法（CLIA）**定量检测血清、血浆、唾液或尿液中的可的松含量。

• 包被抗原：微孔板预包被可的松-蛋白结合物

• 竞争反应：

  • 样本中的可的松与碱性磷酸酶（ALP）标记的可的松竞争结合有限量的抗可的松抗体

  • 形成"抗体-抗原-ALP"复合物

• 信号检测：

  • 加入化学发光底物（CDP-Star®）

  • ALP催化底物产生光信号

  • 发光强度与可的松浓度成反比

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2. 主要特点

• 超高灵敏度：检测下限可达0.05 ng/mL

• 宽检测范围：0.1-100 ng/mL

• 优异特异性：与皮质醇交叉反应＜0.5%

• 全自动兼容：适用于主流化学发光分析仪

• 多种样本兼容：血清、血浆、唾液、尿液等

3. 试剂盒组成

4. 样本处理

• 血清/血浆：

  • 采集后立即离心（3000g，10min）

  • 2-8℃可保存72小时，-20℃长期保存

• 唾液：

  • 使用专用唾液采集管

  • 离心（10000g，5min）去除粘蛋白

• 尿液：

  • 收集24小时尿，调pH至7.0

  • 离心后取上清检测

5. 检测步骤

1. 加样：标准品/样本25μL + 抗体50μL

2. 孵育：37℃震荡孵育45min

3. 洗涤：自动洗板机洗板5次

4. 加酶：每孔加入ALP标记物50μL

5. 孵育：37℃30min

6. 洗涤：洗板5次

7. 显色：加入底物100μL

8. 检测：化学发光仪读数（延迟1s，积分3s）

6. 结果计算

• 建立标准曲线（4参数logistic拟合）

• 计算样本浓度（ng/mL）

• 尿液结果建议用肌酐校正（μg/g Cr）

7. 性能参数

• 灵敏度：0.05 ng/mL

• 线性范围：0.1-100 ng/mL

• 批内变异：＜7%

• 批间变异：＜10%

• 回收率：92-108%

8. 注意事项

1. 避免反复冻融标准品和样本

2. 不同批次试剂不可混用

3. 化学发光底物需现配现用

4. 建议使用非接触式分液系统

5. 严格控制在37±1℃孵育

9. 储存条件

• 未开封试剂盒：2-8℃保存，有效期18个月

• 开封后：微孔板需干燥保存，4周内使用

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10. 应用领域

• 11β-HSD2酶活性评估

• 盐皮质激素相关疾病研究

• 高血压发病机制研究

• 糖皮质激素代谢监测