Biogenes GmbH——CHO | 360-HCP ELISA KITS

中国仓鼠卵巢（CHO）细胞系是*普遍的生物制药表达系统，已被证明可以**地用于蛋白质治疗剂的商业生产。为确保重组表达的生物制药的**性，卫生当局要求通过应用具有高灵敏度和特异性的HCP检测方法来密切监测HCP杂质。CHO|360-HCP ELISA 是一种增强型仿制药 HCP 检测试剂盒，由四种不同的仿制药试剂盒组成，与单一仿制药试剂盒相比，旨在涵盖更广泛的 CHO-HCP 范围。

CHO|360-HCP ELISA 试剂盒（A 型至 D 型）基于独特的检测设计，采用来自两个物种的不同制备的 HCP 抗原和抗体：

• 抗原由CHO-K1和CHO-S模拟发酵获得的总HCP和分馏HCP制备

• 特异性抗体是通过山羊和兔子的平行免疫产生的

这种方法产生了四种不同的 HCP ELISA 试剂盒，它们共同构成了增强型通用 CHO|360-HCP 检测。

CHO|360-HCP ELISA方法在BioGenes根据相应的ICH指南ICH Q2（R1）（“分析程序的验证：文本和方法”）进行了鉴定，由于该方法作为生物测定的性质，该方法略有偏差。

在 1D 和 2D 分析中，≥ CHO|360-HCP 抗原分布的覆盖率证明了所有四种抗体制剂（A 至 D）的高特异性。对于每个 CHO|360-HCP ELISA 试剂盒（A 至 D），在检测工作范围内，在 100±30% 加标抗原的接受标准内，估计三个加标样品的回收率令人满意。CHO|360-HCP ELISA 试剂盒（A至D）的高灵敏度，由验证参数LOD、LOQ和工作范围描述，如下所示：

• LOD ： 0.5 – 1.0 ng/mL

• LOQ ： 2 – 3 ng/mL

• 工作范围：2 – 100 ng/mL

HCP 的回收率很大程度上取决于所使用的 ELISA 试剂盒的类型

为了证明这一点，我们在大量模拟 CHO HCP 样品的基础上测试了 CHO|360-HCP ELISA 试剂盒（A 至 D）和市售的通用 CHO HCP 检测。在大多数情况下，与其他商业试剂盒相比，使用四种 CHO|360-HCP ELISAs 试剂盒中的一种实现了*佳回收率（见右图）。

• 样品 4：使用 ELISA 试剂盒 D 型和市售试剂盒时，ELISA 试剂盒 A、B 和 C 估计回收率为 > 90%

灵敏度较低，后者仅检测到20%的宿主细胞蛋白。

• 由于高估，可能会出现 100% >回收值。

为什么BioGenes在免疫接种前应用HCP分离？

当然，低分子量 （LMW） 蛋白的免疫原性低于大分子蛋白，导致动物免疫后抗 LMW HCP 抗体的产生减少。因此，ELISA或Western Blot可能无法检测到免疫原性或非免疫原性非常弱的HCP。BioGenes'CHO|360-HCP ELISA通过使用总HCP和分馏HCP对动物进行免疫接种来解决这个问题，从而产生了四种不同的HCP ELISA试剂盒（A到D）。

然后再次合并从免疫中获得的抗体，每种抗体都具有三种不同的分子量组分，以将抗体反应性结合到完整的 HCP 谱图中。兔子和山羊的免疫接种可以生成不同的抗体组合，从而在定制样品中更广泛地覆盖HCP。

BioGenes建议：

我们建议首先测试所有四种试剂盒类型（入门套件），然后根据 ELISA 关键参数（如稀释线性、准确度和总覆盖率）选择性能*佳的试剂盒，用于所有后续测试。

通用 ELISA 试剂盒的生成如何

每种增强型通用HCP ELISA试剂盒的生产涉及以下步骤：

• 使用特定抗原材料对个人进行免疫接种

• 多克隆抗体的分离和纯化

• 即用型ELISA试剂盒的生产

每种试剂盒类型的抗体将对总蛋白质谱的子集表现出特异性反应性，并且对给定菌株/细胞系的其他蛋白质表现出弱反应性或无反应性。与总蛋白质相比，被识别的蛋白质比例称为覆盖率。

如何选择*合适的套件？

每个药物制造过程都会产生特定的 HCP 特征。为了实现*佳的 HCP 监测，应应用*佳拟合测试。如图所示，与底部试剂盒相比，上部试剂盒的抗体组合覆盖了示例性项目样本中更广泛的 HCP。因此，由于整体覆盖率更高，上层试剂盒将是监测 HCP 减少情况的更好选择。为了鉴定*适合的通用 360 HCP ELISA 试剂盒，BioGenes 建议对

关键 HCP ELISA 性能标准

• HCP 覆盖率

• 充分减少 HCP 对数

• ELISA准确度

• 样品稀释线性度

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