Biogenes GmbH——E.coli | 360-HCP ELISA KITS

大肠杆菌细胞广泛用于生物制药的生产。在药物开发过程中，残留宿主细胞蛋白（HCP）的分析对于确保生物制药的质量和**性非常重要。对于大肠杆菌，HCP模式受应用的生产条件的强烈影响。仅使用一组抗体的传统通用检测方法并不能充分代表这种多样性。为了克服与传统通用HCP检测相关的局限性，BioGenes开发了增强型通用大肠杆菌|360-HCP ELISA，它由一组四种不同的通用试剂盒组成。

大肠杆菌|360-HCP ELISA 是一种增强型通用宿主细胞蛋白 （HCP） 检测。与其他市售的通用 HCP 检测相比，它旨在涵盖更广泛的大肠道菌宿主细胞蛋白 （HCP）。

大肠杆菌|360-HCP ELISA 基于 W3110 和 BL21 （DE3） 细胞系，它们在不同的培养基和条件下发酵，产生具有不同 HCP 模式的几种抗原制剂。通过用这些抗原对山羊（C型）或兔子（A型、D型和E型）进行免疫接种，BioGenes开发了一组不同的HCP ELISA试剂盒，这些试剂盒共同构建了增强型通用大肠杆菌|360-HCP ELISA。

抗体制剂的高特异性通过覆盖≥ 80% 的大肠杆菌|360-HCP 抗原分布得到证明。使用 Cy5 标记的大肠杆菌|360-HCP 标准品和相应的 Cy3 标记的抗 HCP 抗体，通过 2D 蛋白质印迹测量抗原覆盖率。

在检测工作范围内，在加标抗原的接受标准 100±30% 内，加标样品的回收率令人满意。大肠杆菌|360-HCP ELISA试剂盒的高灵敏度，由验证参数LOD、LOQ和工作范围描述，如下所示：

• LOD ： 0.2 – 0.5 ng/mL

• LOQ ： 0.6 – 1.6 ng/mL

• 工作范围：2 – 100 ng/mL

大肠杆菌中的HCP模式受许多因素的影响

1）大肠杆菌菌株的遗传背景

不同大肠杆菌菌株的基因组显示出显著的多样性。典型的大肠杆菌基因组编码约4,500-5,000个基因，其中约50%的基因在核心基因组中占有一席之地。据估计，大肠杆菌的泛基因组包括大约128,000个基因，因此携带着大量潜在的HCP物种。

2）细胞培养条件

大肠杆菌的基因表达高度依赖于细胞的生长阶段、培养基和补充剂的类型以及生长条件。**代谢途径的重组、应激相关基因的表达和底物降解酶的分泌主要受营养物质的可用性和细胞应激条件（如温度、氧气和盐度）的存在的影响。

3）重组药物的性质

重组（外来）蛋白的过表达可导致重组菌株的蛋白质组相对于代谢功能蛋白、伴侣蛋白和热休克蛋白的表达模式发生显着变化。

为什么选择四种套件类型？

所有这些条件共同影响大肠杆菌发酵过程中发生的独特 HCP 特征，并且没有一个通用试剂盒能够检测出每个 HCP。

大肠杆菌|360-HCP ELISA 可提高检测特异性和灵敏度，使用不同的抗 HCP 抗体组，分为四种试剂盒类型（A 型、C 型、D 型、E 型），以优化 HCP 检测。

• 大肠杆菌抗原的遗传背景：BL21 （DE3） & W3110

• 发酵培养基：LB培养基和矿物培养基

由于预测大肠杆菌中HCP谱的困难，我们建议首先测试所有四种试剂盒类型，然后根据ELISA关键参数（如稀释线性、准确性和总覆盖率）选择性能*佳的试剂盒。 

通用 ELISA 试剂盒的生成如何

每种增强型通用HCP ELISA试剂盒的生产涉及以下步骤：

• 使用特定抗原材料对个人进行免疫接种

• 多克隆抗体的分离和纯化

• 即用型ELISA试剂盒的生产

每种试剂盒类型的抗体将对总蛋白质谱的子集表现出特异性反应性，并且对给定菌株/细胞系的其他蛋白质表现出弱反应性或无反应性。与总蛋白质相比，被识别的蛋白质比例称为覆盖率。

如何选择*合适的套件？

每个药物制造过程都会产生特定的 HCP 特征。为了实现*佳的 HCP 监测，应应用*佳拟合测试。如图所示，与底部试剂盒相比，上部试剂盒的抗体组合覆盖了示例性项目样本中更广泛的 HCP。因此，由于整体覆盖率更高，上层试剂盒将是监测 HCP 减少情况的更好选择。为了鉴定*适合的通用 360 HCP ELISA 试剂盒，BioGenes 建议对

关键 HCP ELISA 性能标准

• HCP 覆盖率

• 充分减少 HCP 对数

• ELISA准确度

• 样品稀释线性度

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