高效液相色谱仪测定食品中环己基氨基磺酸钠的含量
1 原理
食品中的环己基氨基磺酸钠用水提取后,在强酸性溶液中与次氯酸钠反应,生成 N , N - 二氯环己胺,用正庚烷萃取后,利用高效液相色谱仪检测,保留时间定性,外标法定量。
2 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为 GB / T6682 规定的上等水。
2. 1 试剂
2. 1. 1 正庚烷[ CH 3 ( CH 2 ) 5 CH 3 ]:色谱纯。
2. 1. 2 乙腈( CH 3 CN ):色谱纯。
2. 1. 3 硫酸( H 2 SO 4 )。
2. 1. 4 次氯酸钠( NaClO )。
2. 1. 5 碳酸氢钠( NaHCO 3 )。
2. 1. 6 硫酸锌( ZnSO 4 · 7H 2 O )。
2. 1. 7 亚铁qin化钾{ K 4 [ Fe ( CN ) 6 ]· 3H 2 O }。
2. 1. 8 石油醚:沸程为 30℃~60℃ 。
2. 2 试剂配制
2. 2. 1 硫酸溶液( 1+1 ): 50mL 硫酸小心缓缓加入 50mL 水中,混匀。
2. 2. 2 次氯酸钠溶液:用次氯酸钠( 10. 1. 4 )稀释,保存于棕色瓶中,保持有效氯含量 50g / L 以上,混匀,市售产品需及时标定,临用时配制。
2. 2. 3 碳酸氢钠溶液( 50g / L ):称取 5g 碳酸氢钠,用水溶解并稀释至 100mL ,混匀。
2. 2. 4 硫酸锌溶液( 300g / L ):称取折合 30g 硫酸锌( 10. 1. 6 ),溶于水并稀释至 100mL ,混匀。
2. 2. 5 亚铁qin化钾溶液( 150g / L ):称取折合 15g 亚铁qin化钾( 10. 1. 7 ),溶于水并稀释至 100mL ,混匀。
2. 3 标准品：环己基氨基磺酸钠标准品(C 6 H 12 NSO 3 Na ):纯度 ≥99% 。
2. 4 标准溶液配制
2. 4. 1 环己基氨基磺酸标准储备液( 5. 00mg / mL ):按**法 3. 4. 1 配制。
2. 4. 2 环己基氨基磺酸标准中间液( 1. 00mg / mL ):按**法 3. 4. 2 配制。
2. 4. 3 环己基氨基磺酸标准曲线系列工作液:分别吸取标准中间液( 10. 4. 2 ) 0. 50mL 、 1. 0mL 、 2. 5mL 、5. 0mL 、 10. 0mL 至 50mL 容量瓶中,用水定容。该标准系列浓度分别为 10. 0 μ g / mL 、 20. 0 μ g / mL 、50. 0 μ g / mL 、 100 μ g / mL 、 200 μ g / mL 。临用现配。
3 仪器和设备
3. 1 高效液相色谱仪,配有紫外检测器或二极管阵列检测器。
3. 2 超声波振荡器。
3. 3 离心机:转速 ≥4000r / min 。
3. 4 样品粉碎机。
3. 5 恒温水浴锅。
3. 6 天平:感量 1mg 、 0. 1mg 。
4 分析步骤
4. 1 试样溶液的制备
4. 1. 1 固体类和半固体类试样处理
称取均质后试样 5.00g 于 50mL 离心管中,加入 30mL 水,混匀,超声提取 20min,离心(3000r/ min )20min ,将上清液转出,用水洗涤残渣并定容至 50mL 备用。含高蛋白类样品可在超声提取时加入2. 0mL 硫酸锌溶液( 10. 2. 4 )和 2. 0mL 亚铁qin化钾溶液( 10. 2. 5 )。含高脂质类样品可在提取前先加入25mL 石油醚( 10. 1. 8 )振摇后弃去石油醚层除脂。
4. 1. 2 液体类试样处理
4. 1. 2. 1 普通液体试样摇匀后可直接称取样品 25. 0g ,用水定容至 50mL 备用(如需要可过滤)。
4. 1. 2. 2 含二氧化碳的试样:称取 25. 0g 试样于烧杯中, 60℃ 水浴加热 30min 以除二氧化碳,放冷,用水定容至 50mL 备用。
4. 1. 2. 3 含酒精的试样:称取 25. 0g 试样于烧杯中,用氢氧化钠溶液调至弱碱性 pH7~8 , 60℃ 水浴加热 30min 以除酒精,放冷,用水定容至 50mL 备用。
4. 1. 2. 4 含乳类饮料称取试样 25. 0g 于 50mL 离心管中,加入 3. 0mL 硫酸锌溶液( 10. 2. 4 )和 3. 0mL亚铁qin化钾溶液(2. 2. 5 ),混匀,离心分层后,将上清液转出,用水洗涤残渣并定容至 50mL 备用。
4. 1. 3 衍生化
准确移取 10mL 已制备好的试样溶液(4.1. 1 或 4. 1. 2 ),加入 2. 0mL 硫酸溶液(2. 2. 1 ), 5. 0mL正庚烷(2. 1. 1 ),和 1. 0mL 次氯酸钠溶液( 2. 2. 2 ),剧烈振荡 1min ,静置分层,除去水层后在正庚烷层中加入 25mL 碳酸氢钠溶液( 2.2. 3 ),振荡 1min 。静置取上层有机相经 0. 45 μ m 微孔有机相滤膜过滤,滤液备进样用。
3. 2 仪器参考条件
3. 2. 1 色谱柱: C 18 柱, 5 μ m , 150mm×3. 9mm ( i , d ),或同等性能的色谱柱。
3. 2. 2 流动相:乙腈 + 水( 70+30 )。
3. 2. 3 流速: 0. 8mL / min 。
3. 2. 4 进样量: 10 μ L 。
3. 2. 5 柱温: 40℃ 。
3. 2. 6 检测器:紫外检测器或二极管阵列检测器。
3. 2. 7 检测波长: 314nm 。
3. 3 标准曲线的制作
移取 10mL 环己基氨基磺酸标准系列工作液(2.4. 3 )按 12. 1. 3 衍生化。取过 0. 45 μ m 微孔有机相滤膜后的溶液 10 μ L 分别注入高效液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准工作溶液的浓度为横坐标,以环己基氨基磺酸钠衍生化产物 N , N - 二氯环己胺峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。
4. 4 样品的测定
将衍生后试样溶液(4. 1. 3 ) 10 μ L 注入高效液相色谱仪中,保留时间定性,测得峰面积,根据标准曲线得到试样定容溶液中环己基氨基磺酸的浓度,平行测定次数不少于两次。
5 分析结果的表述
试样中环己基氨基磺酸含量按式(2 )计算:
…………………………( 2 )
式中:
X 2———试样中环己基氨基磺酸的含量,单位为克每千克(g/kg);
c———由标准曲线计算出试样定容溶液中环己基氨基磺酸的浓度,单位为微克每毫升(μ g/ mL );
V———试样的*后定容体积 ,单位为毫升( mL );
m———试样的质量,单位为克(g );
1000 ———由 μ g / g 换算成 g /kg的换算因子。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字
高效液相色谱仪测定食品中环己基氨基磺酸钠的含量
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