气相色谱仪测定环己基氨基磺酸钠含量
1 原理
食品中的环己基氨基磺酸钠用水提取,在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸反应,生成环己醇亚硝酸酯,利用气相色谱仪氢火焰离子化检测器进行分离及分析,保留时间定性,外标法定量。
2 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为 GB / T6682 规定的二级水。
2. 1 试剂
2. 1. 1 正庚烷 [ CH 3 ( CH 2 ) 5 CH 3 ]。
2. 1. 2 氯化钠( NaCl )。
2. 1. 3 石油醚:沸程为 30℃~60℃ 。
2. 1. 4 氢氧化钠( NaOH )。
2. 1. 5 硫酸( H 2 SO 4 )。
2. 1. 6 亚铁qin化钾{ K 4 [ Fe ( CN ) 6 ]· 3H 2 O }。
2. 1. 7 硫酸锌( ZnSO 4 · 7H 2 O )。
2. 1. 8 亚硝酸钠( NaNO 2 )。
2. 2 试剂配制
2. 2. 1 氢氧化钠溶液( 40g / L ):称取 20g 氢氧化钠,溶于水并稀释至 500mL ,混匀。
2. 2. 2 硫酸溶液( 200g / L ):量取 54mL 硫酸小心缓缓加入 400mL 水中,后加水至 500mL ,混匀。
2. 2. 3 亚铁qin化钾溶液( 150g / L ):称取折合 15g 亚铁qin化钾( 3. 1. 6 ),溶于水稀释至 100mL ,混匀。
2. 2. 4 硫酸锌溶液( 300g / L ):称取折合 30g 硫酸锌的试剂( 3. 1. 7 ),溶于水并稀释至 100mL ,混匀。
2. 2. 5 亚硝酸钠溶液( 50g / L ):称取 25g 亚硝酸钠,溶于水并稀释至 500mL ,混匀。
2. 3 标准品：环己基氨基磺酸钠标准品(C 6 H 12 NSO 3 Na ):纯度 ≥99% 。
2. 4 标准溶液的配制
2. 4. 1 环己基氨基磺酸标准储备液( 5. 00mg / mL ):准确称取 0. 5612g 环己基氨基磺酸钠标准品,用水溶解并定容至 100mL ,混匀,此溶液 1.00mL 相当于环己基氨基磺酸 5. 00mg (环己基氨基磺酸钠与环己基氨基磺酸的换算系数为 0.8909 )。置于 1℃~4℃ 冰箱保存,可保存 12 个月。
2. 4. 2 环己基氨基磺酸标准使用液( 1. 00mg / mL ):准确移取 20. 0mL 环己基氨基磺酸标准储备液用水稀释并定容至 100mL ,混匀。置于 1℃~4℃ 冰箱保存,可保存 6 个月。
3 仪器与设备
3. 1 气相色谱仪:配有氢火焰离子化检测器( FID )。
3. 2 涡旋混合器。
3. 3 离心机:转速 ≥4000r / min 。
3. 4 超声波振荡器。
3. 5 样品粉碎机。
3. 6 10 μ L 微量注射器。
3. 7 恒温水浴锅。
3. 8 天平:感量 1mg 、 0. 1mg 。
4 分析步骤
4. 1 试样溶液的制备
4. 1. 1 液体试样处理
4. 1. 1. 1 普通液体试样摇匀后称取 25. 0g 试样(如需要可过滤),用水定容至 50mL 备用。
4. 1. 1. 2 含二氧化碳的试样:称取 25. 0g 试样于烧杯中, 60℃ 水浴加热 30min 以除二氧化碳,放冷,用水定容至 50mL 备用。
4. 1. 1. 3 含酒精的试样:称取 25. 0g 试样于烧杯中,用氢氧化钠溶液( 3. 2. 1 )调至弱碱性 pH7~8 , 60℃水浴加热 30min 以除酒精,放冷,用水定容至 50mL 备用。
4. 1. 2 固体、半固体试样处理
4. 1. 2. 1 低脂、低蛋白样品(果酱、果冻、水果罐头、果丹类、蜜饯凉果、浓缩果汁、面包、糕点、饼干、复合调味料、带壳熟制坚果和籽类、腌渍的蔬菜等):称取打碎、混匀的样品 3.00g~5. 00g 于 50mL 离心管中,加 30mL 水,振摇,超声提取 20min ,混匀,离心( 3000r / min ) 10min ,过滤,用水分次洗涤残渣,收集滤液并定容至 50mL ,混匀备用。
4. 1. 2. 2 高蛋白样品(酸乳、雪糕、冰淇淋等奶制品及豆制品、腐乳等):冰棒、雪糕、冰淇淋等分别放置于250mL 烧杯中,待融化后搅匀称取;称取样品 3. 00g~5. 00g 于 50mL 离心管中,加 30mL 水,超声提取 20min ,加 2mL 亚铁qin化钾溶液,混匀,再加入 2mL 硫酸锌溶液,混匀,离心( 3000r / min ) 10min ,过滤,用水分次洗涤残渣,收集滤液并定容至 50mL ,混匀备用。
4. 1. 2. 3 高脂样品(奶油制品、海鱼罐头、熟肉制品等):称取打碎、混匀的样品 3. 00g~5. 00g 于 50mL离心管中,加入 25mL 石油醚,振摇,超声提取 3min ,再混匀,离心( 1000r / min 以上) 10min ,弃石油醚,再用 25mL 石油醚提取一次,弃石油醚,60℃ 水浴挥发去除石油醚,残渣加 30mL 水,混匀,超声提取 20min ,加 2mL 亚铁qin化钾溶液,混匀,再加入 2mL 硫酸锌溶液,混匀,离心( 3000r / min ) 10min ,过滤,用水洗涤残渣,收集滤液并定容至 50mL ,混匀备用。
4. 1. 3 衍生化准确移取液体试样溶液(4. 1. 1 )、固体、半固体试样溶液( 4. 1. 2 ) 10. 0mL 于 50mL 带盖离心管中。离心管置试管架上冰浴中 5min 后,准确加入 5.00mL 正庚烷,加入 2. 5mL 亚硝酸钠溶液, 2. 5mL 硫酸溶液,盖紧离心管盖,摇匀,在冰浴中放置 30min ,其间振摇 3 次 ~5 次;加入 2.5g 氯化钠,盖上盖后置旋涡混合器上振动 1min (或振摇 60 次 ~80 次),低温离心( 3000r / min ) 10min 分层或低温静置20min 至澄清分层后取上清液放置 1℃~4℃ 冰箱冷藏保存以备进样用。
4. 2 标准溶液系列的制备及衍生化
准确移取 1.00mg/ mL 环己基氨基磺酸标准溶液 0.50mL 、 1. 00mL 、 2. 50mL 、 5. 00mL 、 10. 0mL 、25. 0mL 于 50mL 容量瓶中,加水定容。配成标准溶液系列浓度为: 0. 01mg / mL 、 0. 02mg / mL 、 0. 05mg / mL 、0. 10mg / mL 、 0. 20mg / mL 、 0. 50mg / mL 。临用时配制以备衍生化用。准确移取标准系列溶液 10.0mL 同( 4. 1. 3 )衍生化。
4. 3 测定
4. 3. 1 色谱条件
4. 3. 1. 1 色谱柱:弱极性石英毛细管柱(内涂 5% 苯基甲基聚硅氧烷, 30m×0. 53mm×1. 0 μ m )或等效柱。
4. 3. 1. 2 柱温升温程序:初温 55℃ 保持 3min , 10℃ / min 升温至 90℃ 保持 0. 5min , 20℃ / min 升温至200℃ 保持 3min 。
4. 3. 1. 3 进样口:温度 230℃ ;进样量 1 μ L ,不分流/分流进样,分流比 1∶5 (分流比及方式可根据色谱仪器条件调整)。
4. 3. 1. 4 检测器:氢火焰离子化检测器( FID ),温度 260℃ 。
4. 3. 1. 5 载气:高纯氮气,流量 12. 0mL / min ,尾吹 20mL / min 。
4. 3. 1. 6 氢气: 30mL / min ;空气 330mL / min (载气、氢气、空气流量大小可根据仪器条件进行调整)。
4. 3. 2 色谱分析
分别吸取 1 μ L 经衍生化处理的标准系列各浓度溶液上清液( 4.2 ),注入气相色谱仪中,可测得不同浓度被测物的响应值峰面积,以浓度为横坐标,以环己醇亚硝酸酯和环己醇两峰面积之和为纵坐标,绘制标准曲线。在完全相同的条件下进样 1 μ L 经衍生化处理的试样待测液上清液(4.1. 3 ),保留时间定性,测得峰面积,根据标准曲线得到样液中的组分浓度;试样上清液响应值若超出线性范围,应用正庚烷稀释后再进样分析。平行测定次数不少于两次。
5 分析结果的表述
试样中环己基氨基磺酸含量按式(1 )计算:
…………………………( 1 )
式中:
X 1 ———试样中环己基氨基磺酸的含量,单位为克每千克( g /kg);
c———由标准曲线计算出定容样液中环己基氨基磺酸的浓度,单位为毫克每毫升(mg/ mL );
m ———试样质量,单位为克( g );
V———试样的*后定容体积 ,单位为毫升( mL )。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字
气相色谱仪测定环己基氨基磺酸钠含量
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