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高效液相色谱仪测定葡萄酒中8种生物胺的含量
高效液相色谱仪测定葡萄酒中8种生物胺的含量
本文使用丹黄酰氯对目标生物胺进行柱前衍生,采用C18色谱柱(4.6x150mm,5um),以乙腈和水作为流动相,进行梯度洗脱,流速为0.6mL/min,采用紫外检测器,柱温为30℃,检测波长254nm,对8种生物胺进行
高效液相色谱仪
分离分析。
1、试剂和仪器
乙腈:色谱纯,其余试剂均为分析纯,试验用水为自制超纯水;
组胺、酪胺、尸胺、乙胺、苯乙胺、精胺、亚精胺和甲胺,纯度98%以上;
丹磺酰氯。
高效液相色谱仪
:配紫外检测器;
色谱工作站;
十万分之一分析天平;
pH计;
氮吹仪;
磁量进样枪;
高速离心机;
自动双重纯水蒸馏器。
2、色谱条件
C18色谱柱:4.6x150mm,5um;
保护柱:C18,4.0mmx3.0mm,
紫外检测波长:254nm,
柱温:30℃,
进样量:20uL,以峰面积外标法定量。
流动相A:乙腈,流动相B:纯水;梯度洗脱;
流速:0.6 mL/min。
洗脱程序:0min-6min,A为30%--60%;
6min-10min,A为60%~80%;
10min-15min,A为80%-90%;
15min-20min,A为90%30%。
3、生物胺标准溶液的配制
分别称取组胺、酪胺、尸胺、乙胺、苯乙胺、精胺、亚精胺、甲胺10.0mg-18.0mg,用0.1mol/L HCl溶液溶解并转移到10mL容量瓶中,用0.1mol/L HCI溶液定容,作为标准贮备液,30℃保存备用。使用前,根据实验需要将此标准贮备液用0.1mol/L HCI溶液稀释至适宜含量,以配制标准工作液和混合标准工作液,进
高效液相色谱仪
分析。
4、样品前处理和衍生
取葡萄酒样1.5mL,向其中加入NaCl至饱和,然后用NaHCO,调节pH值为8.5,再加入正丁醇:氯仿(1:1)的萃取液进行萃取,旋涡振动后离心。取出上层有机梧,再用等体积的萃取液提取2次,合并萃取液,再使用氮气吹干。用0.1mol/LHCI 1.5ml溶解残留物,待衍生。
取上述1.5mL样品提取液,加入lmg/ml丹黄酰氯衍生剂溶液(溶剂为丙酮)1.5mL,用饱和碳酸氢钠溶液调节pH值为8.4,然后混合振荡。置40℃避光反应60min,反应完后,取出并加100uL氨水来中断反应,混合振荡。衍生后加入3mL乙酸乙酯溶液静置萃取,待分层后取上层有机相,再进行反复萃取3次,合并乙酸乙酯萃取液,40℃水浴条件下氮气吹干。加lmL乙腈溶解残留物,振荡混合,经0.45um微孔滤膜,滤液直接进
高效液相色谱仪
测定。
高效液相色谱仪测定葡萄酒中8种生物胺的含量
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