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高效液相色谱仪测定豆油中脂肪酸的含量

本文介绍甩高效液相色谱仪分析豆油中脂肪酸组成的方法。油脂经皂化后，不需萃取，直接形成脂肪酸的苯乙酮醑，通过梯度淋洗。使分离时间大大缩短。此方法可以直接应用到生物样品。

一、仪器和试剂

高效液相色谱仪，配紫外检测器。

擦榈酸> 99％，

花生酸 > 99％，

硬脂酸> 99.5％，

亚油酸> 99％，

亚麻酸> 99％，

油酸> 99，

∞-溴代苯乙酮 (CP )，使用前用正戊烷重结晶。

三乙胺 (cC P )，使用前重蒸馏纯化。其他试剂均为A R 级。

二、标准样的制备

称取棕榈酸，油酸，亚油酸，亚麻酸各0.015g，硬脂酸0.005g，花生酸 0.001g 混合于10ml正巳烷中。取0.3ml混合披，经氮气吹干浓缩后，以酚酞为指示剂，用0.1mol／L KOH乙醇溶液中和至终点，并再次在N ：下吹千，留待酯化。

三、样品的前处理

取0.05ml 豆油，加5ml 0.5mol／L KOH 乙醇溶液回流30min。取0.3ml 冷却液，以酚酞为指示剂，用盐酸乙醇 (4：1 V ／V ) 溶液中和到终点，并在氮气下吹干留待酯化。

四、酯化

标准样和豆油样品经上述处理后，加入0.2ml ∞一溴代苯乙酮的丙酮溶液(12mg／ml)及0.2ml兰乙胺的丙酮溶液 (10mg／ml)，回流 10min后所得脂肪酸∞一溴代苯乙酮酯混合液即可直接进行高效液相色谱仪分析。

五、高效液相色谱仪分析条件

ODS柱：4.6×150mm

柱温：室温

波长：254nm

流动相：甲醇-水-高氯酸 (85-14.75-0.25) 为开始淋洗液，13min 后，淋洗液变为100％甲醇至分离结束。

流速：2mL／min。

谱图用峰高法定量。

高效液相色谱仪测定豆油中脂肪酸的含量

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