高效液相色谱仪测定食品中四种甜味剂的含量
1、范围
本标准规定了食品中乙酞磺胺酸钾，糖精钠，环己基氨基磺酸钠，阿斯巴甜的高效液相色谱仪测定方法。
本标准适用于饮料中乙酞磺胺酸钾，糖精钠，环己基氨基磺酸钠，阿斯巴甜的测定。
本方法乙酞磺胺酸钾的检出限为0. 05ug/mL；糖精钠的检出限为0. 05ug/mL；环己基氨基磺酸钠的检出限为2.0ug/mL；阿斯巴甜的检出限为0.05ug/mL;
2、规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件，其*新版本适用于本标准。
3、原 理
样品中甜味剂在酸性溶液中以阴离子形式，选用含有类离子对试剂（tris)的甲醇水溶液作流动相，采用反相离子对高效液相色谱仪分离，根据色谱峰的保留时间定性，根据峰高或峰面积定量。
4、试剂
除另有规定，所有试剂均为分析纯，为GB/T 6682规定的上等水。
4. 1甲醇：色谱纯。
4.2稀氨水（(1+1):氨水加水等体积混合。
4. 3 Tris储备液（(0. 5 mol/L）：称取6. 057g三（羟甲基）氨基甲烷溶于超纯水中定容到100 mL,混合均匀。
4.4乙酞磺胺酸钾，糖精钠，环己基氨基磺酸钠，阿斯巴甜标准品：纯度）99%。
4. 5乙酞磺胺酸钾，糖精钠，环己基氨基磺酸钠，阿斯巴甜标准储备溶液：精密秤取乙酞磺胺酸钾、糖精钠各0. 1000 g，用超纯水溶解稀释至10 mL；环己基氨基磺酸钠1. 0000 g，用超纯水溶解稀释至10 mL；阿斯巴甜0. 1000 g用1: 1甲醇水溶液溶解稀释至10 mL；阿斯巴甜、乙酞磺胺酸钾、糖精钠浓度分别为：10.0 mg/mL；环己基氨基磺酸钠浓度为：100.0 mg/mL：于冰箱保存。
4.6混合标准使用溶液：取一定量上述标准储备液混合，用超纯水逐级稀释，配成乙酞磺胺酸钾，糖精钠，阿斯巴甜为1.0 mg/mL的混合标准使用液，环己基氨基磺酸钠浓度为10. Omg/mL的标准使用液。
4. 7混合标准使用系列溶液：准确吸取混合标准使用液0. 00 mL, 0. 05 mL, 0. 10 mL, 0. 20 mL, 0. 40mL, 0. 60 mL，环己基氨基磺酸钠标准使用液0. 00 mL, 0. 10 mL, 0. 50 mL, 1. 0 mL, 2. 0 mL, 4. 0 mL加超纯水定容至10 mL，配成标准系列。其中，乙酞磺胺酸钾、阿斯巴甜、糖精钠其浓度为0. 0 gg/mL,5. 0 mg/mL, 10. 0 mg/mL, 20. 0mg/mL, 40.0mg/mL, 60. 0 mg/mL，环己基氨基磺酸钠浓度0. 0 mg/mL,0. 1 mg/mL, 0. 5 mg/mL, 1. 0 mg/mL, 2.0 mg/mL, 4.0mg/mL，置于冰箱冷藏保存。
5、仪器
5. 1高效液相色谱仪，带紫外检测器。
5.2超声波清洗器。
5. 3离心机。
5.4抽滤瓶。
5. 5微孔滤膜：0. 45 um。
5.6电子天平：感量0.0001g和0. 01g。
6、分析步骤
6. 1样品处理：
称取5. 0 g-10. 0 g（准确到0.01 g)试样，用氨水（1+1)调pH至7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经45 ¦Ìm滤膜过滤，滤液作高效液相色谱仪分析用。
6. 2测定
6.2.1 高效液相色谱仪参考条件
分析柱：C,8 , 4. 6 mmx250mm，粒度5um。
流动相：甲醇：5mmol/L Tris缓冲溶液（pH 4.5）=5: 95。
波长：205nm。
流速：1. 2 mL/min。
柱温：25℃。
6. 2. 2标准曲线：分别进样阿斯巴甜、乙酞磺胺酸钾、糖精钠和环己基氨基磺酸钠标准系列溶液各10uL，进行高效液相色谱仪分析，然后以峰面积为纵坐标，以四种甜味剂的含量为横坐标，绘制标准曲线。
6. 2. 3试样测定：吸取6. 1处理后的试样溶液10uL进行高效液相色谱仪分析，测定其峰面积，从标准曲线查得测定液中四种甜味剂的含量
7、结果计算
试样中甜味剂成分的含量按下式计算：
式中：
X一试样中甜味剂成分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg);
c一由标准曲线上查得进样液中甜味剂成分的量，单位为微克每毫升(ug/mL);
V一试样稀释液总体积，单位为毫升（mL);
m一试样质量，单位为克（g)。
计算结果保留两位有效数字。
高效液相色谱仪测定食品中四种甜味剂的含量
高效液相色谱仪测定食品中四种甜味剂的含量
高效液相色谱仪测定食品中四种甜味剂的含量
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