ELISA实验中检测抗原的方法

日期：2024-11-24 08:14

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摘要：1、ELISA试剂盒双抗体夹心法针对至少2个抗原决议簇的多价抗原。首要介绍一下抗原决议簇，抗原决议簇便是决议抗原性的特殊化学基团，也叫抗原表位，理论上一个抗原决议簇能诱导产生一种单克隆抗体。由6－12氨基酸或碳水基团组成，它可以是由接连序列（线性表位）组成或由不接连的蛋白质三维结构（构象表位）组成。临床上具有2个抗原决议簇的多价抗原有很多，比较常见有HBSAG、AFP、HCG等大分子抗原。检测进程也简略，便是包被、洗刷、加样、洗刷、加样、洗刷、显色。具体说来是先将纯化的相应抗体包被在固相载体上，再参加待测样品，若...

1、ELISA试剂盒双抗体夹心法
针对至少2个抗原决议簇的多价抗原。首要介绍一下抗原决议簇，抗原决议簇便是决议抗原性的特殊化学基团，也叫抗原表位，理论上一个抗原决议簇能诱导产生一种单克隆抗体。由6－12氨基酸或碳水基团组成，它可以是由接连序列（线性表位）组成或由不接连的蛋白质三维结构（构象表位）组成。临床上具有2个抗原决议簇的多价抗原有很多，比较常见有HBSAG、AFP、HCG等大分子抗原。检测进程也简略，便是包被、洗刷、加样、洗刷、加样、洗刷、显色。具体说来是先将纯化的相应抗体包被在固相载体上，再参加待测样品，若其中含有待测抗原就会与固相抗体结合，洗掉杂质后，再参加酶符号的检测抗体进行反响，洗掉多于的酶标抗体后，参加底物显色，显色与否以及颜色的深浅就代表了待测抗原是否存在以及相对含量。

关于双抗体夹心法检测大分子抗原要留意几点：

（1）固相抗体和酶标检测抗体一定是别离针对待测抗原的两个不同抗原决议簇，否则两个抗体就会为争同一个决议簇而打架，会呈现假阴性的不佳成果。
（2）假如检测的样本是血清，就要留意风湿病患者体内内风湿因子RF这种奇葩异种抗体的存在，它可以结合固相抗体和检测抗体，形成假阳性的不佳成果。
（3）包被的固相抗体含量一定是高于样品中的抗原含量，否则检测到的含量会比实践含量低。
（4）假如想优异省事一些，将待测样品与酶标检测抗体一起参加固相载体，在酶标检测抗体高于样品中的待测抗原的情况下呈现假阴性成果，这种现象书本叫钩状效应。

2、ELISA试剂盒竞争法
针对小分子抗原。这种办法也可以用于大分子抗原，仅仅相对双抗夹心法这种强悍的策略，竞争法完全没有优势，所以竞争法只在检测小分子这个边际地带发挥余热了。临床上首要用于T3、T4、孕酮等激su以及药wu等。检测进程与双抗夹心法更简略，包被、洗刷、加样、洗刷、显色，少了一步加样的进程，可是规划上复杂一些，首要将纯化的相应抗体包被在固相载体上，然后每组样本需求分两组，一组一起参加事前混匀好的酶标检测抗原和样本的混合物，一组只参加酶符号抗原，两组颜色差便是待测抗原的含量。
关于竞争法也需求留意一点，酶符号抗原和待测样本一定要事前混匀好，然后一起参加固相载体，否则会形成不公平竞争，检测呈现误差。

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