蛋白质的分离纯化的注意事项

蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛，是一项重要的操作技术。 一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质，一些含量十分丰富，一些仅含有几个拷贝。为了研究某一个蛋白质，必须先将该蛋白质从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化出来。那么纯化的时候需要注意的细节是哪些呢？
注意事项
1.为了避免蛋白质变性，不要对样品剧烈搅动和反复冻融。
2.缓冲溶液成分尽量模拟细胞内环。。
3.为了避免蛋白质的氧化，将0.1~1mmol/LDTT（二硫苏糖醇）(或β-巯基乙醇）加入到缓冲溶液中。
4.为了避免重金属对目标蛋白的破坏，将1~10mmol/LEDTA金属螯合剂加入。
5.为了避免微生物生长，使用清洗溶液。在纯化任何一种蛋白质的时候，均必须时刻对它的稳定性注意维护，使它的活性得到保护，需要牢记如下一些通用的注意事项。
6.尽可能置于冰上或者在冷库内进行操作。
7.蛋白浓度不要太稀。
8.除非是进行聚焦层。否则pH需要合适，防止所使用的缓冲溶液pH与pI相同，使蛋白质的沉淀得以避免。
9.使用蛋白酶抑制剂，避免蛋白酶对目标蛋白的降解；在纯化细胞中的蛋白质时，将DNA酶加入来使得DNA降解，避免DNA对蛋白的污染。
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