细胞培养也叫细胞克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞,这是克隆技术必须 的环节,而且细胞培养本身就是细胞的克隆。接下来来了解在培养细胞的实验中有有几种试剂:
(1)高糖DMEM溶液: 用新配制的三蒸水配制,高糖DMEM干粉(规格10×1L),溶入约总量的1/3的三蒸水,并用水洗净包装袋,在磁力搅拌器上搅拌30分钟,加入NaHCO2 3.75克,补加水至终量。用1N HCL调整PH为7.2,0.22μm滤膜抽滤除 菌,分装-20℃保存,使用时加10%的胎牛血清及双抗溶液(终浓度:青霉素100U/ml,链霉素 100μg/ml)
(2) 胎牛血清: 使用前56℃水浴30分钟灭活,无菌条件下分装成10ml包装,-20℃保存。用时以10%浓度注入培养液中。
(3) 青霉素、链霉素双抗溶液 青霉素100万单位及硫酸链霉素1g无菌条件下溶于消 毒三蒸水10ml,分装,-20℃保存。使用时每1000ml培养液加入青、链霉素混合液1ml,终浓度为青霉素100单位/ml,链霉素100μg/ml。
(4)磷酸盐溶液(PBS): NaCl 8g, KCl 0.4g, NaHPO4.H2O 1.15g KH2PO4 0.2g 分别溶于1000ml三蒸水中,调节PH值至7.4高压蒸气灭 菌,分装后4℃保存。
(5)胰蛋白酶溶液: 用三蒸水制备成0.25%浓度,0.22μm滤膜抽滤除 菌,4℃保存。
(6)0.1%明胶溶液: 称取明胶粉剂0.1g于烧杯中,加入三蒸水100mL于50℃充分搅拌至其*溶解,0.22μm滤膜抽滤除 菌,4℃保存。