PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
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产品名称
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猪圆环病毒2型（PCV-2）试剂盒恒温荧光法
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规格
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48T
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货号
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XG-R64273
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储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
小鼠T细胞;Cl.Ly1+2-/9 小鼠肝动脉内皮细胞完全培养基 100mL大内皮素-1（1-38），人Big Endothelin-1
(1-38), human质量规格：>95%,BR
MLF, 小鼠成纤维细胞 Mouse大内皮素-1 （1-39），猪Big Endothelin -1
(1-39),porcine质量规格：>95%,BR
FZD10 Others Mouse 小鼠 FZD10 / Frizzled-10 / CD350 人细胞裂解液 (阳性对照) 脑钠素-32，大鼠BNP-32, rat质量规格：>95%,BR
人结直肠腺癌细胞;LS 174T [LS174T]铃蟾肽Bombesin质量规格：>95%,BR
TLR2 Others Rat 大鼠 TLR2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 缓激肽Bradykinin质量规格：>95%,BR
新生牛眼晶体上皮细胞;NBLE苯骈三氮唑（BTA,1,2,3-苯骈三氮唑)1H-Benzotriazole质量规格：AR,分析
NCI-H2087细胞，人非小细胞肺腺癌细胞 逆转录病毒包装的NIH3T3细胞,PA317细胞 CM-R095大鼠成年表皮角质形成层细胞完全培养基100mL盐酸倍他司汀Betahistine Di质量规格：>99%,BR
RL95-2(人内膜癌细胞) 5×106cells/瓶×2盐酸倍他司汀（标准品）Betahistine Di质量规格：HPLC>98%,标准品
Gibco 10725018 Keratinocyte-SFM (1X), Liquid with
L-Glutamine, without Calcium Chloride 500 ml甲磺酸倍他司汀Betahistine Dimesilate质量规格：>98%,BR
人骨骼肌卫星细胞RNAHSkMSC miRNA5 μg胰岛素(猪)INSULIN质量规格：BR,来源猪胰脏
MSR1 Others Rat 大鼠 MSR1 / SCARA1 人细胞裂解液 (阳性对照) 磺，英文名或英文缩写：Sulfamer，级别：BR，95-100%，规格：100毫升
肾实质细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)3，3-二安基联本安言醋盐 3,3',4,4'-Biphqnyltqtrcminq tqtrcxy7nochloridq
3T6swiss细胞，小鼠胚胎成纤维细胞 人癌细胞,M453细胞 谷胱甘肽过氧化物酶分析试剂盒GPXβ-蛋白组学级透明无色液体RT不sigma
SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-1脱叶灵，英文名或英文缩写：TDZ，级别：高，99%，规格：50毫克
IL13RA2 Others Human 人 IL13RA2 / IL13R 人细胞裂解液 (阳性对照) 7778-80-5钾potewwium
sulfate;Tartarus vitriolatus;Salt of leMery
猪热休克蛋白20(HSP-20)ELISAKit ELISA.
96T/48T Sorafenib tosylate 中文名：索拉非尼 分子式：C28H24ClF3N4O6S
猪去甲上腺素elisa试剂盒 猪去甲上腺素试剂盒 规格型号：96T/48T 猪去甲上腺素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：猪去甲上腺素试剂盒、猪去甲上腺素eisa试剂盒 保存条件：2-8℃ 保质期：6个月。 Sorafenib
284461-73-0 中文名：索拉非尼 分子式：C21H16ClF3N4O3 度：98.0% 关键词：
猪去甲上腺素(NE)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Soyacerebroside I 中文名： 分子式：C40H75NO9 度：95.0%
猪去甲上腺素(NE)ELISAKit
ELISA. 96T/48T Soyacerebroside II 中文名：大豆脑苷II 分子式：C40H75NO9 度：98.0%
猪圆环病毒2型（PCV-2）试剂盒恒温荧光法猪前列环素（PGI2）Elisa试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Soyacerebroside I
114297-20-0 中文名： 分子式：C40H75NO9 度：95.0% 关键词： 抗溃疡; 番杏; 大豆; 大蒜; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库