PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加��一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
|
产品名称
|
志贺氏菌试剂盒恒温荧光法
|
|
规格
|
48T
|
|
货号
|
XG-R64433
|
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
28-去甲基-β-香树脂酮厂家 28-demethyl -β-amyrone 英文名称Ratα1-AcidglycoproteinELISAKit大鼠α1-酸性糖蛋白(α1-AGP)规格：96T/48T
28978-02-1大蓟苷厂家 Pectolinarin 英文名称Ratα1-AcidglycoproteinELISAKit大鼠α1-酸性糖蛋白(α1-AGP)规格：96T/48T
28957-04-2冬凌草甲素说明书 Oridonin 英文名称RatVWFELISAKit大鼠血管性血友病因子(VWF)规格：96T/48T
28831-65-4紫草酸规格 lithospermic acid 英文名称RatVWFELISAKit大鼠血管性血友病因子(VWF)规格：96T/48T
28831-65-4紫草酸规格 Lithospermic acid 英文名称RatVitaminCELISAKit大鼠维生素C(VC)规格：96T/48T
载玻片细胞蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒-LEPTIN10/20 3621-38-3药根碱规格 Jatrorrhizine
MouseADisiegrinAndMetalloprotease9,ADAM9ELISA试剂盒小鼠解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒规格：96T/48T 315-22-0野百合碱厂家 Crotaline
小鼠整合素α3(ITGα3)ELISA试剂盒 ，英文名： ITGα3 ELISA Kit 27740-01-8野黄芩苷说明书 Scutellarin
热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA检测试剂盒MonkeyHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit
96T/48T 529-53-3野黄芩素品牌 Scutellarein
犬内皮素1(ET-1)试剂盒 Dog Endothelin 1,ET-1 ELISA
Kit 877822-41-8野马追内酯A规格 Eupalinolide A
小鼠孕/孕酮(PROG)ELISA试剂盒 ，英文名： PROG ELISA
Kit 70831-56-0二咖啡酰菊苣酸规格 Cichoric acid
小鼠多巴胺(DA)ELISA检测试剂盒Mousedopamine,DAELISAKit
96T/48T 86632-03-33,4,5-三咖啡酰奎宁酸厂家 3,4,5-Tricaffeoylquinic acid
人解整合素样金属蛋白酶33(ADAM33)试剂盒 Human A Disiegrin And
Metalloprotease 33,ADAM33 ELISA Kit
31721-94-55,7-二羟基色原酮说明书
5,7-dihydroxychromone
Ratai-alpha-FodrinIgG/IgA,α-FodrinIgG/IgAELISAKit大鼠抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISA试剂盒规格：96T/48T 107390-08-9伽升沃D品牌 Garcinone D
组蛋白H2A-T1291酸化检测试剂盒10/20等 76996-27-5伽升沃C规格 Garcinone C
中性粒细胞趋化蛋白-2 英文名称： neuophilicgranulocyte chemokines Protein
2 规格： 48T/96T 英文缩写： GCP-2
Androstenediol 中文名：雄烯二醇 分子式：C19H30O2
中性粒细胞趋化蛋白 -2(GCP-2) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 Nitrendipine 中文名：尼群地平 分子式：C18H20N2O6
中性粒细胞明胶酶相关性载脂蛋白 英文名称： Neuophil gelatinase-associated
lipocalin 规格： 48T/96T 英文缩写： NGAL
3-Hydroxychimaphilin 中文名：3-羟基梅笠草素 分子式：C12H10O3 度：98.0%
中性粒细胞活化肽 (NAP) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 Testosterone isocaproate 中文名：异己酸 分子式：C25H38O3 度：98.0%
中性粒细胞防御素 英文名称： Neuophil Peptide-1 规格： 48T/96T 英文缩写： HNP-1
Testosterone undecanoate 中文名：十一酸 分子式：C30H48O3 度：98.0%
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
志贺氏菌试剂盒恒温荧光法三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
- 温馨提示：为规避购买风险，建议您在购买前务必确认供应商资质与产品质量。
- 免责申明：以上内容为注册会员自行发布，若信息的真实性、合法性存在争议，平台将会监督协助处理，欢迎举报