枯草芽孢杆菌试剂盒恒温荧光法

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
SW1116(人结肠腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 小肠隐窝上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)番泻苷D（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Sennoside D

小鼠肺腺癌细胞系;LA795二氢辣椒碱（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Dihydrocapsaicin

人羊膜上皮细胞(HAEpic)( 5×105 )五味子酯乙（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Schizandrol B

CM-R120大鼠角膜上皮细胞完全培养基100mL柴胡皂苷B1（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品SaikosaponinB1

小鼠胚胎成纤维细胞;3T3-L1 小鼠成纤维细胞完全培养基 100mL番茄碱（标准品）质量规格：HPLC≥98%,标准品Tomatidine
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-P1 骨髓瘤细胞，P3X63Ag8.653细胞 RN-c细胞，大鼠皮层神经元细胞杀螟丹(标准品)Aramite质量规格：分析标准品,99%

人脐静脉内皮细胞;HUV-EC杀螟丹标准溶液(100μg/ml,u=3%)Aramite solution质量规格：100μg/ml,u=3%

LIFR Others Mouse 小鼠 LIFR / CD118 人细胞裂解液 (阳性对照) Amberlite?IRA402 强碱型阴离子交换树脂(氯型)Amberlite? IRA402质量规格：氯型

脑动脉血管内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)Amberlite XAD-1180N 非离子型多孔树脂(粒径0.350 - 0.600 mm)Amberlite® XAD1180N质量规格：粒径0.350 - 0.600 mm

CTLA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 CTLA4 / CD152 人细胞裂解液 (阳性对照) 嘧菌酯（标准品）Azoxystrobin质量规格：分析标准品
CD86 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD86 / B7-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 二十七烷shēng huà shì jì容量：保存：-20℃500毫克

兔晶体上皮细胞永生系;N/N1003A(RLE)无水录化(II) CHROMIUM(II) CHLORIDq 10049-02-2

QG-56细胞，人肺扁平上皮癌细胞 中国仓鼠仓鼠卵巢细胞亚株,CHO-K1细胞 CM-M010小鼠肺大动脉平滑肌细胞完全培养基100mL聚乙二醇 12000 Poly(ethylene glycol) 12,000 (PEG 12000) 25322-68-3 500G 通用试剂

Saos-2(人骨肉瘤细胞) 5×106cells/瓶×2赤霉素GA4+7shēng huà shì jì容量：RT5克

Gibco 12558-011 TM-C100 Complete Medium,(system) 1 setDicamba 1g/5g Sigma 523844
中文名称   方法   规格  Alogliptin  中文名：阿格列汀  分子式：C18H21N5O2  度：98.0%

中文名称   方法   规格  3-(5-(2-Aminopropyl)-7-cyanoindolin-1-yl)propyl benzoate (2R,3R)-2,3-dihydroxysuccinate  中文名：  分子式：C26H31N3O8  度：98.0%

中文名称   方法   规格  2-Benzyl-2-(dimethylamino)-4'-morpholinobutyrophenone  119313-12-1  中文名：2-苄基-2-(二甲基氨基)-4'-吗啉基苯基丁酮  分子式：C23H30N2O2 

中文名称   方法   规格              Naftifine   65473-14-5  中文名：盐酸萘替芬  分子式：C21H22ClN 

中文名称   方法   规格              N,N'-Bis(2-hydroxyethyl)oxamide  1871-89-2  中文名：N,N'-双(2-羟乙基)草酰胺  分子式：C6H12N2O4
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
枯草芽孢杆菌试剂盒恒温荧光法1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。