蜡样芽胞杆菌试剂盒恒温荧光法

PCR实验方法步骤：
方���
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

大鼠胚胎心肌细胞;H9c2(2-1)蛋白激酶C（530-558）质量规格：>95%,BRProtein Kinase C (530-558)

HCT 116细胞，结肠癌细胞 人肝癌细胞,Bel-7404细胞 CL-0016A549(人非小细胞肺癌细胞)5×106cells/瓶×2甲状旁腺相关蛋白拼接同种型3（104-173），人质量规格：>95%,BRpTH-Related Protein Splice Isoform 3 (140-173) (human)

二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞;CHO/dhFr-甲状旁腺（13-34），人质量规格：>95%,BRpTH (13-34) (human)

CSF1R Others Human 人 M-CSFR 人细胞裂解液 (阳性对照) 甲状旁腺（3-34），牛质量规格：>95%,BRpTH (3-34) (bovine)

小梁网细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)胆酸质量规格：≥98%,BR，无水Cholic acid
中国仓鼠卵巢细胞;CHOUTP;5‘-三1酸尿苷三钠UTP, Tri Salt质量规格：>98%,BR

SCARB2 Others Human 人 SCARB2 / LIMP2 / CD36L2 人细胞裂解液 (阳性对照) Fmoc-N'-甲基三苯甲基-L-赖氨酸Fmoc-Lys(Mtt)-OH质量规格：0.98

气管上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)芴甲氧羰基-O-苄基-L-苏氨酸Fmoc-Thr(Bzl)-OH质量规格：0.98

IFNA1 Others Rat 大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 人细胞裂解液 (阳性对照) N'-Fmoc-L-赖氨酸Fmoc-Lys-OH质量规格：>98%

大鼠尿道上皮细胞完全培养基 100mLFmoc-天门冬氨酸-β-苄酯Fmoc-L-aspartic acid β-benzyl ester质量规格：>98%
RN-h, 大鼠海马趾神经元 Rattus琼脂糖凝胶6FF1克2～8℃

EPHA7 Others Mouse 小鼠 EPHA7 / EHK-3 人细胞裂解液 (阳性对照) 顺-十轻-1-酚 CIS-DqCcxy7no-1-NcPHTHOL 99 36129-47-4

人B细胞瘤细胞;RAMOS1,2,3,4-环丁四羧二酐 Cyclobutcnq-1,2,3,4-tqtrcccrboxylic dicnhydridq 4412-87-6

GREM1 Others Mouse 小鼠 Gremlin 1 / GREM1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 麦芽浸膏汤shēng huà shì jì容量：100克

CL-0445Sp2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤细胞)5×106cells/瓶×2ConcanavalinA 25mg/100mg Amresco分装
中文名称   方法   规格              Clopidogrel bisulfate  中文名：硫酸氢氯吡格雷  分子式：C16H18ClNO6S2 

中文名称   方法   规格              5-O-Ethylcleroindicin D  中文名：  分子式：C10H16O4 

致病性大肠杆菌(EPEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T  Topiramate  中文名：托吡酯  分子式：C12H21NO8S  度：98.0%

质粒中量提取试剂盒   Plasmid Exaction Kit  Torososide A  165689-32-7  中文名：  分子式：C38H32O15  度：%  关键词：  植物提取物; 天然产物; 天然产物库

质粒中量提取试剂盒   50T  trans-4-Aminocyclohexanol  27489-62-9  中文名：  分子式：C6H13NO  度：98.0%  关键词：
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
蜡样芽胞杆菌试剂盒恒温荧光法６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

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