LS174T细胞说明书

培养方法：
收到后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：
如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml培养液继续培养。
如果细胞已长满（达80-90%）。即可进行传代，具体步骤如下：
a，弃去培养液，用PBS洗1-2次。
b，向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有6ml 含10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。
c，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养
d，传代比例：1:2-1:3

产品详细　结直肠腺癌细胞；LS174T

形态特性　上皮样

生长特性　贴壁生长

特征特性 LS 174T是LS 180 (ATCC CL 187)结肠腺癌细胞株的胰蛋白酶化变种。 它比亲本更易传代，象LS 180一样**大量的癌胚抗原(CA-A)。 电镜研究表明有丰富的微丝和细胞质粘液素液泡。 直肠抗原3阳性。 p53抗原表达阴性，但mRNA表达阳性。 与ATCC CL-187来源于同一个肿瘤。LS 174T细胞角蛋白染色阳性。 癌基因CS-myc, N-myc, H-ras, N-ras, Myb, 和 fos的表达呈阳性。 癌基因k-ras和sis的表达未做检测。

 培养条件 DMEM(高糖）+10%FBS

传代方法 1：2传代

运输和保存：
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

操作流程：
1.1主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线。

总碱度测定试剂盒   Total alkalinity determination kit  Rebeprazole   中文名：雷贝拉唑钠  分子式：C18H20N3NaO3S  度：98.0%

总基酸（T－AA）检测   Hydroxyproline sample preeatme                 Androstadienedione  中文名：1,4-雄烯二酮  分子式：C19H24O2 

总基酸（T－AA）测试盒   The total amino acid (TAA) test kit  Rengynic acid  中文名：  分子式：C8H14O4  度：98.0%

总合成酶（NOS）测试盒[测总NOS（T－NOS）]  Raltegravir  中文名：雷特格韦  分子式：C20H21FN6O5  度：98.0%

总合成酶（NOS）测试盒[测总NOS（T－NOS）]  Androst-5-ene-3β,17β-diol 3,17-diacetate  2099-26-5  中文名：雄甾-5-烯-3β,17β-二醇 3,17-二乙酸酯  分子式：C23H34O4
Propargite,10ng/ul 标准品 Nitrapyrin  10ng/ul于乙腈,10ML 特征形态 液态

喔草酯 标准品 Nitenpyram  10ng/ul于环己烷，10ML 特征形态 液态

敌稗溶于环己烷 标准品 Neburon  10ng/ul于环己烷，10ML 特征形态 液态
2，3，6-三氯甲苯标准品 Carminicacid(E120) 2077-46-5 10ng/ul于甲醇，1ml

(Z)-苯氧菌胺， 标准品 Ethoxyfen 133408-51-2 10ng/ul于乙腈，1ML

菲，10ng/ul 标准品 Phenanthrene 31055 10ng/ul于环己烷，10ml
BHQ CPG *0 Å*0mg其它天然产物

BHQ CPG *00 Å*0mgTaxilluside A16619146

Chemical Phosphorylation Reagent I0mgn-Butyl β-D-fructofuranoside971-正丁基-β-D-呋喃果糖苷

LS174T细胞说明书Chemical Phosphorylation Reagent II0mgPalmitone23棕榈酮

5'-Amino-Modifier C6, MMT-protected1g9-Oxooctadeca0,12-dienoic acid542328
公司来源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等知名品牌），活力>95%，贴壁性好。我们从试剂、包被器皿、冻存原代细胞、新鲜原代细胞、原代细胞的分子学实验等提供全程服务。我司拥有专业的实验室，可无菌操作并提供相关科研项目解决方案以及实验服务。本产品仅能用于科研

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