大丽花轮枝孢

仪器设备与器具：

1 恒温培养箱：36±1℃。

2 1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。

3 接种针。

4 显微镜。

5 超净工作台。

6 玻片、酒精灯、洗耳球、试管架。

7 天平：感量0.01g。

8 釜。

9 培养皿（直径为90mm）、试管，经121℃、30分钟。

10试管夹、酒精灯、秒表、载玻片

产品名称：大丽花轮枝孢

拉丁文：  Verticillium dahliae Klebahn

**等级  1

模式菌株  no

应用领域  棉花黄萎病菌。

培养方法

培养基  综合PDA：马铃薯煮汁1000mL，磷酸二氢钾 3g，硫酸镁 1.5g，葡萄糖 20g，维生素B1 10mg，琼脂 20g，pH自然。马铃薯煮液：200g马铃薯，去皮，切块，放入蒸馏水中煮沸30min，取滤液定容至1000mL,备用。121℃，15min。

生长条件  24-28℃，好氧

①简单保存法，将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过1～2个月，若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达3～4个月；②液氮超低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至 -35℃时，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法长期保存。

脱水存法：

①沙土保存法，能产孢子、放线菌及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合，经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;2～3次，烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子，用无菌蒸馏水2～2.5ml制成孢子悬液，吸取少许加入沙土管中，经真空抽干，外观呈松散状态,于4℃冰箱保存，保存期可达5～7年。

② 冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂（一般用脱脂牛奶或血清）相混合，放在安瓿管内于-20～-30℃的乙醇浴中速冻。然后，在低温下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽结冻，熔封安瓿管，于低温下保存。保存期可达5～10年之久。

③ 石蜡油封存法，在斜面菌种培养物上,倒上后的石蜡油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低温干燥处保存，此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物，保存期为一年以上。

菌种的使用范围:

（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，酿酒酵母菌组成成分，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 

（2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 

（3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。

微生物菌种的培养：

     ⒈ 孢子制备

     ⑴ 孢子的制备

     一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1％，氮源不超过0.5％)，碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境，不利于形成，氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下，干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。面的培养温度大多数为28 ℃，少数为37 ℃，培养时间为5～14天。

     ⑵ 霉菌孢子的制备

     霉菌的孢子培养，一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖，而且这类培养基的表面积较大，可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25～28 ℃，培养时间为4～14天。

     ⒉ 种子制备

     ⑴ 摇瓶种子制备

     摇瓶种子进罐，常采用母瓶、子瓶两级培养，有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全，并易被菌体分解利用，氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓，子瓶培养基浓度比母瓶略高，更接近种子罐的培养基配方。

     ⑵ 种子罐种子制备

    大丽花轮枝孢 种子罐种子制备的工艺过程，因菌种不同而异，一般可分为种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中，经培养后形成大量的菌丝，这样的种子称为种子，把子转入发酵罐内发酵，称为二级发酵。如果将种子接入体积较大的种子罐内，经过培养形成更多的菌丝，这样制备的种子称为二级种子，将二级种子转入发酵罐内发酵，称为三级发酵。同样道理，使用三级种子的发酵，称为四级发酵。

2，4，6-三氯苯甲酸 标准品 Trichloroacetonitrile,certified 50-43-1 纯品型，0.1G 特征形态 固态

2，3，6-Trichlorobenzoic acid，certified Trichloroaceticacidsodiumsalt 50-31-7 纯品型，100mg 特征形态 固态

2,4,5-三氯苯乙酮 标准品 PCBNo.78 13061-28-4 纯品型，10mg 特征形态 固态

人尿微量白蛋白(MAU)酶联吸附测定试剂盒 别称:UMA Human MAU(Microalbuminuria) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组MAU浓度

N-(4-Cyanophenyl)glycine  中文名：  分子式：C9H8N2O2    猪α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒  

N-(2-Methyl-5-nitrophenyl)-4- (pyridin-3-yl)pyrimidin-2-amine  中文名：  分子式：C16H13N5O2    猪α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒  

N-(2-methyl-4-oxopentan-2-yl)-sulfamethoxazole  中文名：  分子式：C16H21N3O4S    猪S-100B蛋白（S-100B）ELISA试剂盒            

N-(2-Hydroxyethyl)-3-(4-nitrophenyl)propylamine  中文名：  分子式：C11H16N2O3    猪β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISAKit  

N-(2,6-Dimethylphenyl)-2-piperidinecarboxamide  中文名：  分子式：C14H20N2O    猪食欲素受体(OXR)ELISAKit

野马追内酯B（标准品）  Eupalinolide B  质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔白介素17(IL-17)ELISA检测试剂盒RabbitIerleukin17,IL-17ELISAKit 96T/48T

长春瑞滨（标准品）  Vinorelbine  质量规格：HPLC≥98%,标准品，长期不稳定 兔半胱氨酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)ELISA检测试剂盒RabbitCystatinC,Cys-CELISAKit 96T/48T

长春瑞滨（标准品）  Vinorelbine tartrate  质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔补体蛋白3(C3)ELISA检测试剂盒RabbitCompleme3,C3ELISAKit 96T/48T

硝呋太尔  Nifuratel  质量规格：>98%,BR 兔超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA检测试剂盒RabbithighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit 96T/48T

硝呋太尔(标准品)  Nifuratel  质量规格：HPLC>99%,标准品 兔儿茶酚胺(CA)ELISA检测试剂盒Rabbitcatecholamine,CAELISAKit 96T/48T

羟基酪醇；3,4-二羟基苯乙醇(标准品)  Hydroxytyrosol  质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔钩端螺旋体IgG(Lebtospira)ELISA检测试剂盒RabbitLebtospiraIgGELISAKit 96T/48T

棕矢车菊素（标准品）  4',5,7-Trihydroxy-3',6-dimethoxyflavone  质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔骨桥素(OPN)ELISA检测试剂盒RabbitOsteopoin,OPNELISAKit 96T/48T

银椴苷；椴树苷（标准品）  Tiliroside  质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)ELISA检测试剂盒RabbitPeroxisomeProliferator-activatedreceptorγ,PPAR-γELISAKit 96T/48T

芫花素（标准品）  4',5-Dihydroxy-7-methoxyflavone  质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔合成酶(NOS)ELISA检测试剂盒Rabbitniicoxidesyhase,NOSELISAKit 96T/48T

客西茄碱（标准品）  Khasianine  质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔环0酸腺苷(cAMP)ELISA检测试剂盒Rabbitcyclicadenosinemonophosphate,cAMPELISAKit 96T/48T

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