操作步骤:
步骤1:配制程序冻存液,放在室温备用或放在4℃预冷
步骤2:离心收集对数生长期的细胞(贴壁细胞消化下来离心,悬浮细胞直接离心,转速1200rpm或250g,时间3min)
步骤3:用配制好的冻存液重悬细胞,按照1~1.5mL/管分装到冻存管中,拧紧管盖,做好标记
步骤4:冻存管放入冻存盒,冻存盒放入-80℃冰箱过夜(24h)
步骤5:冻存管从冻存盒取出,转移至液氮长期保存
方法二:使用无血清非程序冻存液
无血清非程序冻存液是一种商品化的冻存液,无需自己配制,无需降温盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有细胞都适用于这种冻存液,使用前必须做冻存测试,没问题后再批量应用。
细胞特性
产品名称
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KASUMI-1人红白血病细胞
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英文名称
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KASUMI-1:KASUMI1
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分类
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人细胞系
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货号
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XG-X3389
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组织来源
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外周血,急性原粒细胞白血病
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形态
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原粒细胞
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细胞别称:KASUMI-1; Kasumi 1; KASUMI1;
Kasumi1;人急性白血病细胞;人急性原粒细胞白血病细胞;人急性髓母白血病细胞
种属来源:人
年龄性别:7岁,男
组织来源:外周血,急性原粒细胞白血病
生长特性:悬浮生长
细胞形态:原粒细胞
背景简介:Kasumi-1细胞具有人急性白血病细胞的典型特征,是研究人急性白血病的**材料。Kasumi-1细胞是一个带有8:21号染色体转位的白血病细胞株,这个转位使得AML1基因和ETO(或称MTG8)基因串联,使融合基因AML1-ETO(也称作AML1-MTG或RUNX1-CBF2T1)的表达升高,因而细胞产生嵌合的AML1-ETO蛋白。这个蛋白下调CEBPA mRNA、蛋白和DNA的结合活性,而这种结合对粒性白细胞的分化是极端重要的。Kasumi-1细胞建立于一位急性白血病患者的外周血,Kasumi-1细胞髓过氧化物酶阳性,显示其髓性成熟的形态。增生试验显示,培养的Kasumi-1细胞对IL-3、IL-6、G-CSF(粒细胞集落刺激因子)、GM-CS(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)有响应,但对IL-1和IL-5没有响应。在体外液体培养中分别加入二甲亚砜、G-CSF、IL-5,也没有观察到粒性或嗜酸性细胞的成熟。Kasumi-1细胞培养过程中,加入佛波酯可以看到诱导出的巨噬细胞样细胞。
生物等级:1
细胞规格:1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测:无
基因表达情况:
保藏机构:ATCC; CRL-2724 DSMZ; ACC-220
培养基:RPMI-1640+20% FBS+1%GlutaMAX-1谷氨酰胺+1%Sodium Pyruvate丙酮酸钠+PS
培养条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件:无血清冻存液,液氮储存
倍增时间:~48-72 hours
STR鉴定位点Amelogenin:X,Y;D5S818: 9,11;D13S317:
11,13;D7S820: 8,11;D16S539:
9,12;vWA: 14;THO1: 6,9;Amelogenin: X;TPOX: 8,9;CSF1PO: 10,12
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
一.培养基及培养冻存条件准备
1) 准备1640(推荐iCell-0002)培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
细胞处理
1) 冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
公司正在出售的产品:
活化T细胞核因子胞浆相互作用蛋白2抗体
NFATC2IP
7号染色体开放阅读框34抗体
C7orf34
甲状腺转录因子-2抗体 Anti-TTF-2/FOXE1
Patched/PTCH抗体 Anti-Patched/PTCH
骨桥蛋白抗体(分泌型磷蛋白1)人 Anti-OPN/BSP
电压门控钠通道5α抗体 Anti-Nav1.5/SCN5A
卵母细胞透明带糖蛋白3抗体
Zona pellucida
glycoprotein 3
DNAJC5B蛋白抗体
DNAJC5B
磷酸化血管内皮生长因子受体2抗体 Anti- phospho-VEGFR2(Tyr951)
神经肿瘤Nova1抗原抗体 Anti-Nova1
RAS相关蛋白Rab5B抗体 Anti-Rab5b
结构蛋白家族3抗体 Anti-TCTN3/TECT3
大鼠白介素2可溶性受体β链(sIL-2Rβ)elisa分析检测试剂盒
KASUMI-1人红白血病细胞sIL-2Rβ ELISA kit
人肌养蛋白(dystrophin)elisa分析检测试剂盒
HumandystrophinELISAKit
山羊γ干扰素(IFN-γ)elisa检测试剂盒免费代测
组织游离酶连续循环荧光定量检测试剂盒
小鼠锌结合α2-糖蛋白1(αZGP1)elisa检测试剂盒
大鼠抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)elisa分析检测试剂盒
KTI12蛋白抗体
KTI12
Bcl2样凋亡蛋白14抗体
BCL2 like 14
植物L-抗坏血酸过氧化物酶2,细胞质(APX2)elisa分析检测试剂盒
cytosolic(APX2)ELISA
kit
人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3(MAPKAPK3)elisa分析检测试剂盒
HumanMAPKAPK3ELISAKit
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