操作步骤:
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步骤1:配制程序冻存液,放在室温备用或放在4℃预冷
步骤2:离心收集对数生长期的细胞(贴壁细胞消化下来离心,悬浮细胞直接离心,转速1200rpm或250g,时间3min)
步骤3:用配制好的冻存液重悬细胞,按照1~1.5mL/管分装到冻存管中,拧紧管盖,做好标记
步骤4:冻存管放入冻存盒,冻存盒放入-80℃冰箱过夜(24h)
步骤5:冻存管从冻存盒取出,转移至液氮长期保存
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方法二:使用无血清非程序冻存液
无血清非程序冻存液是一种商品化的冻存液,无需自己配制,无需降温盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有细胞都适用于这种冻存液,使用前必须做冻存测试,没问题后再批量应用。
细胞特性
产品名称
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SW620人结直肠腺癌细胞
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英文名称
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SW620:SW620
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分类
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人细胞系
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货号
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XG-X3567
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组织来源
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结直肠腺癌,来自转移结
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形态
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上皮细胞样
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细胞别称:SW-620; SW 620; SW.620;人肠癌细胞
种属来源:人
年龄性别:男;51岁
组织来源:结直肠腺癌,来自转移结
生长特性:贴壁生长
细胞形态:上皮细胞样
背景简介:SW480源自一位51岁白人男性患者的原位直肠腺癌,而SW620源自同一病人一年后的结转移灶。该细胞CSAp和直肠抗原3阴性;角蛋白阳性;p53基因第273位密码子的G→A突变引起Arg→His替代,309位密码子的C→T突变导致Pro→Ser替代;细胞p53蛋白表达水平升高;癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表达呈阳性;未检测到癌基因N-myc的表达;不表达Matrilysin(一种与肿瘤侵袭相关的金属蛋白酶)。有报道称该细胞表达GM-CSF。ras原癌基
生物等级:1
细胞规格:1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测:无
基因表达情况:Carcinoembryonic antigen
(CEA) 0.15 ng/10^6 cells/10 days; transforming growth factor alpha; matrilysin.
The cells are negative for expression of CSAp (CSAp-) and colon antigen 3,
negative. The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining. The
line is positive for expression of c-myc, K-ras, H-ras, N-ras, Myb, sis and fos
oncogenes.
保藏机构:ATCC; CCL-227 ECACC; 87051203 ;中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心
培养基:90%L15+10% FBS+PS
培养条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件:无血清冻存液,液氮储存
倍增时间:~20-26 hours
STR鉴定位点Amelogenin:X;CSF1PO:13,14;D13S317:12;D16S539:9,13;D18S51:13;D19S433:13;D21S11:30,30.2;D2S1338:24;D3S1358:15,16;D5S818:13;D7S820:8,9;D8S1179:13;FGA:24;TH01:8;TPOX:11;vWA:16;
运输和保存
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干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
一.培养基及培养冻存条件准备
1) 准备1640(推荐iCell-0002)培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
细胞处理
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1) 冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
公司正在出售的产品:
小鼠α1抗胰糜蛋白酶(AACT)elisa检测试剂盒
人肺炎衣原体抗体(Cpn-Ab)elisa检测试剂盒
特殊营养基
小鼠组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)elisa检测试剂盒
大鼠葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)elisa检测试剂盒
沉默调节样蛋白SirT7抗体 Anti-SIRT7
核受体RXRα抗体 Anti-RXR Alpha/RXRA/Retinoid X receptor
肾病样蛋白2抗体 Anti-NLG1/KIRREL2
锌指蛋白415抗体 Anti-ZNF415
蜜蜂微孢子虫蛋白抗体 Bee Microsporidia
protein
囊泡相关膜蛋白8单克隆抗体 VAMP8
FCN3蛋白抗体 FCN3
FITC标记小鼠CD45RB单克隆抗体 mouse
CD45RB/FITC
血管内皮生长因子D型抗体 VEGF-D
延伸因子结合蛋白EFTUD2抗体 EFTUD2
蛋白酶体PSMα8抗体 PSMA8
凋亡素抗体 apoptin
SW620人结直肠腺癌细胞碳酸酐酶12抗体 CA12
源盒蛋白D13抗体 HOXD13
Rad52抗体 Rad52
Rho家族GTP酶3抗体 RND3
2号染色体开放阅读框72抗体 C2orf72
6号染色体开放阅读框151抗体 C6orf151
基质金属蛋白酶-17抗体 MMP17
碱性成纤维细胞生长因子受体1(CD331)抗体 FGFR1
大鼠淀粉样前体蛋白(APP)elisa检测试剂盒
小鼠凝血因子Ⅷ(FⅧ)elisa分析检测试剂盒
人CD22分子(CD22)elisa检测试剂盒
人血清抗体
human serum
gp130结合蛋白GAM抗体
AES
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