操作步骤(仅供参考):
1.配制65mM H2O2基液:本试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2浓度约为1M。由于过 氧化氢不是非常稳定,使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。把浓度约为1M的H2O2基液用本试剂盒提供的CAT Assay buffer稀释100倍,使H2O2基液中的H2O2浓度约为10mM。
2.准备样品:
a,细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行裂解,可以采用Leagene Western及IP 细胞裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离心取上清,-70℃冻存,用于CAT的检测。
b,血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备,用生理盐水10倍稀释后, 可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-70℃冻存,用于CAT的检测。
c,全血样品:收集适量的全血(whole blood)至一抗凝管内,颠倒混匀。取100μl全 血冻融一次,用CAT Assay buffer1000倍后进行CAT检测。
d,血液中的红细胞裂解液:用抗凝管收集血液,颠倒混匀。取至少500μl全血4℃ 3000g离心5min,弃上清,沉淀用预冷的生理盐水洗涤3次。
e,高活性样品:如果样品中含有较高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀释。
f,(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续 计算单位蛋白重量组织或细胞内的CAT含量。
3、 CAT检测:按照下表设置空白管、自身对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并 注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测能设置平行孔。
4、分光光度计检测405nm处吸光度,分光光度计比色杯光径0.5cm。如果没有分光光度计,亦可用酶标仪检测,但如果有条件,尽量采用分光光度计检测。蒸馏水调零,读取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。
【友情提示】:本产品仅供科研研究使用,不得用于临床直接检测。避免给您带来不必要的损失,请仔细阅读购买说明!
产品名称:EGFR (Ab-1092) Antibody
规格:详见说明
测试方法:详见说明
客户自备仪器和试剂:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。
特点:
1、优化设计的实验方案,1小时即可完成
2、灵敏度高,操作便捷
3、试剂盒提供检测果糖所需的全套试剂
常见样本处理方法:
1、血清(浆)样品:直接检测。
2、组织:按照组织质量(g) :提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g组织,
加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
样品制备:
1). 直接或稀释使用清亮无色中性液体样品,体积可达2.000ml。
2). 过滤混浊溶液。
3). 除去样品中的CO 2 (果糖含量测试盒说明书过过滤)。
4 ). 果糖含量测试盒说明书过加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。
5 ). 调整酸性浅色样品的PH值至8.0,孵育约15分钟。
6 ). 用空白样品做对照测定有色样品(如有必要调整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。
8 ). 压碎、搅匀固体或半固体样品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez试剂将含有蛋白质的样品去蛋白。
10).含脂肪的样品用热水提取。
实验通用规则:
1、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
2、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
3、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。
4、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。
5、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
6、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
7、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
8、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加彻底。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
9、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
10、底物是光敏感的,要在临用前现配。
FITC标记的兔抗小鼠IgGRabbit Anti-mouse IgG/FITC 0.3ml
嗜酸粒细胞趋化蛋白CCL1抗原CCL1/TCA3/I-309 0.5mg
p70S6Kb抗原p70 S6 Kinase/P70 Beta1 0.5mg
整合素样金属蛋白酶与凝血酶样4蛋白抗体英文名称:ADAMTSL4 0.2ml 铁蛋白(Ferritin)ELISA试剂盒 Ferritin ELISA Kit
小鼠碳酸酐酶2CA-2(Mouse carbonic anhydrase 2) ELISA KIT 96T
人抗IgE受体抗体Human anti-IgE receptor antibody ELISA Kit 96T
磷酸化热休克蛋白β5/αb晶体蛋白质/α-晶体蛋白b链抗体英文名称:phospho-alpha B Crystallin (Ser59) 0.1ml 组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)ELISA试剂盒 TFPI-2 ELISA Kit
腺苷脱氨酶抗体英文名称:Adenosine deaminase 0.1ml 胰岛淀粉样多肽(IAPP)ELISA试剂盒 IAPP ELISA Kit
巴尔得-别德尔综合征相关蛋白2抗体英文名称:BBS2 0.2ml 膜联蛋白Ⅶ(ANX-Ⅶ)ELISA试剂盒 ANX-Ⅶ ELISA Kit
细胞骨架相关蛋白4抗体英文名称:CKAP4 0.2ml 多巴胺脱羧酶(DDC)ELISA试剂盒 DDC ELISA Kit
9号染色体开放阅读框61抗体英文名称:C9orf61 0.2ml 噬酸性细胞趋化因子-2(Eotaxin-2)ELISA试剂盒 Eotaxin-2 ELISA Kit
脱氧核糖核酸酶2抗体英文名称:DNase II 0.2ml 细胞周期素F(CCNF)ELISA试剂盒 CCNF ELISA Kit
人麻疹病毒MV(Human morbillivirus) ELISA Kit 96T
GDP甘露糖焦磷酸化酶B抗体英文名称:GMPPB 0.2ml 肌糖δ(SGCδ)ELISA试剂盒 SGCδ ELISA Kit
人内源性逆转录病毒膜糖蛋白2抗体英文名称:HERV-FRD 0.2ml 蛋白激酶Cθ(PKCθ)ELISA试剂盒 PKCθ ELISA Kit
神经突触蛋白NGL3抗体英文名称:LRRC4B 0.2ml B- 色素瘤抗原5(BAGE5)ELISA试剂盒 BAGE5 ELISA Kit
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