操作步骤(仅供参考):
1.配制65mM H2O2基液:本试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2浓度约为1M。由于过 氧化氢不是非常稳定,使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。把浓度约为1M的H2O2基液用本试剂盒提供的CAT Assay buffer稀释100倍,使H2O2基液中的H2O2浓度约为10mM。
2.准备样品:
a,细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行裂解,可以采用Leagene Western及IP 细胞裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离心取上清,-70℃冻存,用于CAT的检测。
b,血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备,用生理盐水10倍稀释后, 可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-70℃冻存,用于CAT的检测。
c,全血样品:收集适量的全血(whole blood)至一抗凝管内,颠倒混匀。取100μl全 血冻融一次,用CAT Assay buffer1000倍后进行CAT检测。
d,血液中的红细胞裂解液:用抗凝管收集血液,颠倒混匀。取至少500μl全血4℃ 3000g离心5min,弃上清,沉淀用预冷的生理盐水洗涤3次。
e,高活性样品:如果样品中含有较高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀释。
f,(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续 计算单位蛋白重量组织或细胞内的CAT含量。
3、 CAT检测:按照下表设置空白管、自身对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并 注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测能设置平行孔。
4、分光光度计检测405nm处吸光度,分光光度计比色杯光径0.5cm。如果没有分光光度计,亦可用酶标仪检测,但如果有条件,尽量采用分光光度计检测。蒸馏水调零,读取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。
【友情提示】:本产品仅供科研研究使用,不得用于临床直接检测。避免给您带来不必要的损失,请仔细阅读购买说明!
产品名称:IKK-β (Ab-199) Antibody
规格:详见说明
测试方法:详见说明
客户自备仪器和试剂:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。
特点:
1、优化设计的实验方案,1小时即可完成
2、灵敏度高,操作便捷
3、试剂盒提供检测果糖所需的全套试剂
常见样本处理方法:
1、血清(浆)样品:直接检测。
2、组织:按照组织质量(g) :提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g组织,
加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
样品制备:
1). 直接或稀释使用清亮无色中性液体样品,体积可达2.000ml。
2). 过滤混浊溶液。
3). 除去样品中的CO 2 (果糖含量测试盒说明书过过滤)。
4 ). 果糖含量测试盒说明书过加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。
5 ). 调整酸性浅色样品的PH值至8.0,孵育约15分钟。
6 ). 用空白样品做对照测定有色样品(如有必要调整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。
8 ). 压碎、搅匀固体或半固体样品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez试剂将含有蛋白质的样品去蛋白。
10).含脂肪的样品用热水提取。
实验通用规则:
1、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
2、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
3、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。
4、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。
5、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
6、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
7、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
8、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加彻底。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
9、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
10、底物是光敏感的,要在临用前现配。
硫代硫酸钾(>98%,BR) Potassium thiosulfate 10294-66-3 质量规格:>98%,BR 体液精氨酸(arginine)含量化学比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
草酸钛钾二水(>98%,BC) Potassium titanyl oxalate ,dehydrate 14402-67-6 质量规格:>98%,BC 植物精氨酸(arginine)含量化学比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
对苯二甲醛(>98%,BR) p-Phthaldehyde 623-27-8 质量规格:>98%,BR 酒类精氨酸(arginine)含量化学比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
丙基红(>80%,Ind Grade) Propyl red 270648 质量规格:>80%,Ind Grade 饮料精氨酸(arginine)含量化学比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
吡唑(>98%,BR) Pyrazole 288-13-1 质量规格:>98%,BR 通用型精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
焦磷酸(>45%,BR) Pyrophosphoric acid 206975 质量规格:>45%,BR 细胞精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
奎宁(>98%,BC) Quinine 130-95-0 质量规格:>98%,BC 组织精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
土耳其红油 Red oil 8002-33-3 质量规格:BR 血液精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
倒千里光碱 Retrorsine 480-54-6 质量规格:>90%,进分 体液精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
罗丹明B基(>97%,BS) Rhodamine B base 509-34-2 质量规格:>97%,BS 植物精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
罗丹宁(>98%,Ind Grade) Rhodanine 141-84-4 质量规格:>98%,Ind Grade 酒类精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
S-乙酰基硫代碘化胆碱(>99%,医药级) S-Acetylthiocholine iodide 1866-15-5 质量规格:>99%,医药级 饮料精氨酸(arginine)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
N-丁二酸,S-乙酰基巯基乙二醇酯(>98%,BR) S-Acetylthioglycolic acid N-hydroxysuccinimide ester 76931-93-6 质量规格:>98%,BR 通用型精氨酸(arginine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
水杨醇(>98%,BR) Salicyl alcohol 32880 质量规格:>98%,BR 细胞精氨酸(arginine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
IKK-β (Ab-199) Antibody小鼠羧甲基赖氨酸(CML)ELISA试剂盒 英文名: CML ELISA Kit
大鼠胆囊收缩素(CCK)ELISA试剂盒 英文名: CCK ELISA Kit
小鼠山梨醇脱氢酶(SDH)ELISA试剂盒 英文名: SDH ELISA Kit
小鼠VI型胶原(COL6)ELISA试剂盒 英文名: COL6 ELISA Kit
大鼠热休克蛋白β6(HSPβ6)ELISA试剂盒 英文名: HSPβ6 ELISA Kit
小鼠1,25二羟基维生素D3(1,25 DHVD3)ELISA试剂盒 英文名: 1,25 DHVD3 ELISA Kit
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA试剂盒 英文名: TIMP-3 ELISA Kit
豚鼠端粒酶(TE)ELISA试剂盒 英文名: TE ELISA Kit
小鼠基质金属蛋白酶12(MMP12)ELISA试剂盒 英文名: MMP12 ELISA Kit
小鼠白介素2受体α(IL2Rα)ELISA试剂盒 英文名: IL2Rα ELISA Kit
大鼠肠型脂肪酸结合蛋白(FABP2)ELISA试剂盒 英文名: FABP2 ELISA Kit
小鼠嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPX)ELISA试剂盒 英文名: EPX ELISA Kit
大鼠心钠肽(ANP)ELISA试剂盒 英文名: ANP ELISA Kit
小鼠细胞周期素D1(CCND1)ELISA试剂盒 英文名: CCND1 ELISA Kit
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