鲍肌肉萎缩症病毒荧光-PCR法

订购信息：

产品名称：鲍肌肉萎缩症病毒荧光-PCR法

英文名称：Abalone Shriveling Syndromeassociated Virus(AbSV)PCR
货号：BJ-01R3211

产品规格：50T

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：现货

-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。

【适用仪器】:

ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。

【样本采集、存放及运输】：

u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；

u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（多冻融3次）；

u 运输：采用**或泡沫箱加冰密封进行运输。

【自备试剂】:

核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

1、 酶标板：一块（96孔）

2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、 样品稀释液：1×20ml。

4、 检测稀释液A：1×10ml。

5、 检测稀释液B：1×10ml。

使用方法:

一、样品 RNA 的制备

1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout

2、或柱式病毒 RNAout。

二：RT（逆转录）反应合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）

2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。

3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），

反应终体积为 20μL。

4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。

5. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。

实验注意事项：

1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；

2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；

3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。

4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括量和相对定量）和定性分析。

主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

泰乐菌素单克隆抗体 小鼠单抗 1

红霉素检测试剂盒 小鼠单抗 0.1

庆大霉素单克隆抗体 小鼠单抗 0.1

头包类**单克隆抗体 小鼠单抗 0.5

头包啦啶单克隆抗体 小鼠单抗 0.5

头包噻呋单克隆抗体 小鼠单抗 0.5

已烯雌酚单克隆抗体 小鼠单抗 0.1

雌二醇单克隆抗体 小鼠单抗 0.1

雌三醇单克隆抗体 小鼠单抗 0.05

HRP标记雌三醇单克隆抗体 小鼠单抗 0.05

甲基睾酮单克隆抗体 小鼠单抗 0.1

喹乙醇单克隆抗体 小鼠单抗 1

苏丹红单克隆抗体 小鼠单抗 0.1

三聚氰胺单克隆抗体 小鼠单抗 1

赛庚啶多克隆抗体 兔多抗 0.1

地塞米松多克隆抗体 兔多抗 0.5

金刚烷胺多克隆抗体 兔多抗 10

B1检测试剂盒 小鼠单抗 0.025

M1检测试剂盒 小鼠单抗 0.05

哥伦比亚血琼脂平板（9cm） 10个/包 用于营养要求高的分离、培养和溶血试验

Columbia Blood Agar

巧克力琼脂平板（9cm） 10个/包 用于嗜血杆菌、奈瑟氏菌分离培养

Chocolate Agar

伊红美���琼脂平板（9cm） 10个/包 弱选择性培养基、用于分离肠道致病菌，特别是大肠杆菌

Eosin-Methylene Blue Agar

SS琼脂平板（9cm） 10个/包 用于沙门氏菌、志贺氏菌的选择性分离培养

Salmonella Shigella Agar

HE琼脂平板（9cm） 10个/包 用于沙门氏菌的选择性分离培养

Hektoen Enteric Agar

XLD培养基平板（9cm） 10个/包 选择性培养基，主要用于分离志贺氏菌属，亦可用于分离沙门氏菌

Xylose Lysine Desoxycholate Medium

亚硫酸铋琼脂平板（9cm） 10个/包 用于沙门氏菌的选择性分离

Bismuth Sulfite Agar

中国蓝琼脂平板（9cm） 10个/包 弱选择性培养基，用于肠道致病菌的选择性分离

China Blue Agar

麦康凯琼脂平板（9cm） 10个/包 用于肠道致病菌的选择性分离、培养

MacConkey Agar

鲍肌肉萎缩症病毒荧光-PCR法山梨醇麦康凯琼脂（SMAC）平板（9cm） 10个/包 用于大肠杆菌O157的分离培养

Sorbitol Maconkey Agar Base

结晶紫中性红胆盐琼脂平板（9cm） 10个/包 用于大肠菌群的固体平板检测

Violet Red Bile Agar

品红亚硫酸钠琼脂平板（9cm） 10个/包 用于饮用水、水源水中总大肠菌群的选择性分离和确证

Fuchsin Basic Sodium Sulfide Agar

MFC琼脂平板（9cm） 10个/包 用于大肠菌群的滤膜法检测

PCR反应的特异性决定因素为：

①引物与模板DNA特异正确的结合；

②碱基配对原则；

③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；

④靶基因的特异性与保守性。

其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。

(2) 灵敏度高

PCR产物的**量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在学中zui小检出率为3个。

(3) 简便、快速

PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。

(4) 对标本的纯度要求低

不需要分离病毒或及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

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