PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
订购信息:
产品名称:双歧杆菌属通用荧光-PCR法
英文名称:Bifidobacterium spp.PCR
货号:BJ-01R3347
产品规格:50T
运输:低温
保存:负20度
有效期:一年
货期:现货
【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存,避免反复冻融,有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】:
u 样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
u 存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(多冻融3次);
u 运输:采用**或泡沫箱加冰密封进行运输。
本公司产品仅用于科研。
【自备试剂】:
核酸提取试剂,如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒,也可选择其他合适的核酸提取产品。
组成及试剂配制:
1、 酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意:可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆转录)反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系(20 μL 体系)
2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆转录酶(含 RI),
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用,丌需要纯化。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
SID 3712249 (MiR-544 Inhibitor 1) 1mg S100B Human, His 1mg Suc-Ala-Phe-Lys-AMC 500mg
PX 12 10μg Y.Enterocolitica (O:9) LcrV 1mg BGP-15 10mM(in1mLDMSO)
BMS 687453 100mg Piperoxan hydrochloride (Benodaine hydrochloride) 1mg Debrisoquin (hemisulfate) 5mg
IGFBP3 Human 25mg CSN2 Human 2μg Tizanidine 500μg
IL 12 Mouse 5mg D-(-)-Citramalic Acid (lithium salt) 25mg NP118809 50mg
15(S)-HETE-biotin 10mg CPLX1 Human 10mM(in1mLDMSO) Asoxime (chloride) 50mg
LDHA Rat 50mg Spirofylline 5mg Rucaparib (free base) 5mg
Chikusetsusaponin Iva (Calenduloside F) 500mg Carebastine 100mg (rac)-Antineoplaston A10 10mg
Ningetinib 50mg Necrostatin 2 racemate 10mg pGlu-Pro-Arg-MNA monoacetate 5μg
Proadrenomedullin (N-20) (human) (trifluoroacetate salt) 50mg Z-Arg-Arg-βNA 5mg (5R)-BW-4030W92 5mg
Mca-VDQVDGW-K(Dnp)-NH2 10mg Amlexanox (AA673) 1mg Antileukinate 250mg
DL-Homocystine 1mg IRAK inhibitor 3 1mg CBL-018 10mg
Fursultiamine 10mg ZT-1a 20μg (H-Cys-OtBu)??· 2 HCl 5mg
Bromazolam 1mg IL 12 p40 Human Baculovirus 2μg FRAX597 10mg
Z-D-Glu-OH 10mM(in1mLDMSO) Malic enzyme inhibitor ME1 10mM*1mLinDMSO TL02-59 100mg
双歧杆菌属通用荧光-PCR法黄芩素 英文名称对照品 含量:含量测定用 20mg/支 IFRD1 干扰素相关发育调节蛋白1抗体(神经生长因子诱导蛋白PC4)规格: 0.2ml
胡黄连苷-Ⅱ 英文名称对照品 含量:含量测定 20mg/支 PERP/p53 apoptosis effector related to PMP22 p53凋亡相关作用蛋白PMP22抗体规格: 0.1ml
雷公藤酯甲 英文名称对照品 含量:TLC-UV法含量测定 20mg/支 phospho-GATA-4(ser 262) 磷酸化GATA结合蛋白4抗体规格: 0.1ml
脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯 英文名称对照品 含量:含量测定 20mg/支 GPR109A/Puma gamma G蛋白偶联受体109A抗体规格: 0.2ml
丹参酮ⅡA磺酸钠 英文名称对照品 含量:鉴别 20mg/支 SCN3B 电压门控钠通道SCN3B蛋白抗体规格: 0.2ml
芒果苷 英文名称对照品 含量:含量测定 20mg/支 TIS11D/ERF2 表皮生长因子反应蛋白2抗体规格: 0.2ml
金龙胆草提取物 英文名称对照品 含量:鉴别 20mg/支 xCT/CCBR1 钙离子通道阻端耐药蛋白CCBR1抗体规格: 0.2ml
甘草苷 英文名称对照品 含量:含量测定 20mg/支 TSSC3 肿瘤抑制转移候选基因3抗体规格: 0.2ml
苯丙氨酸 英文名称对照品 含量:鉴别 20mg/支 TTI1 转录因子相互作用蛋白1抗体规格: 0.2ml
- 温馨提示:为规避购买风险,建议您在购买前务必确认供应商资质与产品质量。
- 免责申明:以上内容为注册会员自行发布,若信息的真实性、合法性存在争议,平台将会监督协助处理,欢迎举报