使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆转录）反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）
2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。
订购信息：
产品名称：弗氏柠檬酸杆菌荧光-PCR法
英文名称：Citrobacter freundiiPCR
货号：BJ-01R3463
产品规格：50T
运输：低温
保存：负20度
有效期：一年
货期：现货
【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】：
u 样本采集：各类��样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（多冻融3次）；
u 运输：采用**或泡沫箱加冰密封进行运输。
本公司产品仅用于科研。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。
组成及试剂配制:
1、 酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
Tiagabine 10mg CLDN4 Human 25mg N,N`-Diphenylformamidine 10mg
Barnidipine 1mg 2’,5’-dimethoxy Fentanyl (hydrochloride) 50mg Propentofylline 5mg
Boc-Phe-Osu 5mg MIG Human, His 50mg Pinostrobin 10mg
SYT3 Human 1mg STIP1 Mouse 5mg 6β-Oxycodol N-oxide 5mg
5-fluoro PB-22 4-hydroxyisoquinoline isomer 10mg ADAT2 Human 5mg Oxotremorine M iodide 25μg
C2 Phytoceramide (t18:0/2:0) 5mg Troponin-C2 Human 50mg Doxorubicin (Adriamycin) HCl 10mg
CD5L Human, HEK 1mg Pavinetant (MLE-4901) 5mg (S)-IDO1-IN-5 25μg
Procyclidine hydrochloride ((±)-Procyclidine hydrochlorid) 1mg Notoginsenoside Fa 10mM(in1mLDMSO) FITC-εAhx-HHV-2 Envelope Glycoprotein G (561-578) 50mg
DDT Mouse 10μg LP 922056 1mg SKA-121 2mg
Lipoxin A4 methyl ester 250mg KIAA0513 Human 1g Orcinol gentiobioside 100mg
Amino-PEG4-C2-amine 5mg Indole-3-Acetic Acid (sodium salt) 5μg D9 100mg
MTSEA 5g Centhaquin 5mg Dansylamide 10mM*1mLinDMSO
FUBIMINA N-(5-hydroxypentyl) metabolite 500mg Mefloquine hydrochloride 5mg Z-cis-Hyp-OH 10mM*1mLinDMSO
1,2,3-Tri-γ-linolenoyl-rac-glycerol 5mg Dicirenone 10mg Yangambin 10mg
(Des-Cys1,cyclo(Ser2-Asu??)-Calcitonin (eel) 50mg Z-Pro-OSu 5mg Secoxyloganin 1μg
弗氏柠檬酸杆菌荧光-PCR法门冬酰胺酶（大肠杆 ） 英文名称对照品 含量：供门冬酰胺酶鉴别用 20mg/支 FAM98B FAM98B蛋白抗体规格: 0.2ml
门冬酰胺酶（欧文 ） 英文名称对照品 含量：供门冬酰胺酶鉴别用 20mg/支 FAM91A1 FAM91A1蛋白抗体规格: 0.2ml
鲑降钙素 英文名称对照品 含量：鲑降钙素有关物质和鉴别 20mg/支 ODF2/Cenexin1 精子尾部结构蛋白抗体规格: 0.1ml
5’-胞苷酸 英文名称对照品 含量：胞磷胆碱钠有关物质 20mg/支 FAM84B/BCMP101 乳腺癌膜相关蛋白101抗体规格: 0.2ml
4'羟基 英文名称对照品 含量：尿多酸肽HPLC含量 20mg/支 TEF4/TEA domain family member 2 转录增强因子TEF4抗体规格: 0.2ml
5'-羟基吲哚乙酸 英文名称对照品 含量：尿多酸肽HPLC含量 20mg/支 FAM113A FAM113A蛋白抗体规格: 0.2ml
马尿酸 英文名称对照品 含量：尿多酸肽HPLC含量 20mg/支 FAM21C FAM21C蛋白抗体规格: 0.2ml
苯乙酰谷胺酰胺 英文名称对照品 含量：尿多酸肽HPLC含量 20mg/支 FAM13C1 FAM13C1蛋白抗体规格: 0.2ml
抗眼镜蛇毒血清 英文名称对照品 含量：科博肽鉴别 20mg/支 FAM161A FAM161A蛋白抗体规格: 0.2ml
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