使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆转录）反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）
2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。
订购信息：
产品名称：柯萨奇病毒型变种PCR实验试剂
英文名称：Coxsackie Virus(CA24v)A24RTPCR
货号：BJ-01R3509
产品规格：50T
运输：低温
保存：负20度
有效期：一年
货期：现货
【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】：
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（多冻融3次）；
u 运输：采用**或泡沫箱加冰密封进行运输。
本公司产品仅用于科研。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。
组成及试剂配制:
1、 酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
Malabaricone C 5g LLY507 1mg HU 211 50mg
5,7,4'-Trimethoxyflavone 2mg VAS2870 10μg MK-8245 10mg
Vanillyl alcohol 25mg 1,2,3-Triheptadecanoyl-rac-glycerol 1mg CD74 Human, Sf9 5mg
Ac-Glu-Glu-Val-Val-Ala-Cys-pNA 10mg Vatalanib (PTK787) 2HCl 5mg Sincalide (CCK-8) 1mg
4E1RCat 100g Tyr-Amyloid P Component (27-38) amide 25mg Enocyanin 20μg
N-(4-acetamidophenyl)-Indomethacin amide 5mg MIK665 (S-64315) 10mg IL 16 Human, (121 a.a.) 1mg
Vincetoxicoside B 250mg ARN726 5mg OSR2 Human 10mM(in1mLDMSO)
RWJ-51204 5g Patulin 50mg M CSF Human, Baculovirus 50mg
Batroxobin 1mg VU0364770 hydrochloride 100mg QKI Human 5g
FPR A14 20μg BTTAA 50mg Neurotoxin Inhibitor 10mM*1mLinWater
BAY-u 9773 2μg H-Methioninol 5g GSK 650394 20mg
Licochalcone D 10mM*1mLinDMSO Boc-Dab(Fmoc)-OH 10mM*1mLinDMSO Oleoyl Ethyl Amide 10mM(in1mLDMSO)
Piperoxan hydrochloride (Benodaine hydrochloride) 10mg Falintolol, (Z)- 10mM(in1mLDMSO) Sinapine thiocyanate 25mg
MI-3 1mg H-Gly-His-Arg-Pro-NH2 25mg FSL-1-FLAG 1mg
RG-12525 (NID 525) 500mg CD3G Protein 1mg Lindleyin 1g
柯萨奇病毒型变种PCR实验试剂地奥司明 英文名称香叶木苷; 布枯苷 含量：Diosimin 20mg/支 Annexin II/Annexin A2 膜粘连蛋白 Ⅱ抗体规格: 0.1ml
香蒲新苷 英文名称香蒲新甙 含量：Typhaneoside 20mg/支 PRKD3 蛋白激酶C nu型抗体规格: 0.2ml
哈巴俄苷 英文名称哈巴俄甙;哈巴脂苷 含量：Harpagoside 20mg/支 phospho-PRKD3(Ser41) 磷酸化蛋白激酶C nu型抗体规格: 0.1ml
哈巴苷 英文名称哈帕苷; 哈帕甙; 瓜钩草苷 含量：Harpagide 20mg/支 SLC30A3/ZNT3 溶质载体锌转运3抗体规格: 0.2ml
安格洛甙C 英文名称安格洛苷C 含量：Angoroside C 20mg/支 Viperin/RSAD2 病毒抑制蛋白Viperin抗体规格: 0.2ml
10-脱乙酰巴卡亭 英文名称10-脱巴卡丁Ⅲ 含量：10-Deacetylbaccatin III 20mg/支 Annexin Ⅲ 膜粘连蛋白A3抗体规格: 0.1ml
知母皂苷BII 英文名称知母皂苷B2 含量：Timosaponin BII 20mg/支 Annexin IV 膜粘连蛋白 A4抗体规格: 0.1ml
知母皂苷A3 英文名称知母皂苷AⅢ; 知母皂苷A-III 含量：Timosaponin A3 20mg/支 BZW2 BZW2蛋白抗体规格: 0.2ml
白当归素 英文名称比克白芷内酯; 比克白芷素 含量：Byakangelicin 20mg/支 TPH2 5色氨酸羟化酶2抗体规格: 0.2ml
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