订购信息：
产品名称：肠道病毒EV型(EV-)荧光-PCR法
英文名称：详见说明
货号：BJ-01R5007
产品规格：48T/盒
运输：低温
保存：负20度
有效期：一年
货期：现货
【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】：
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（多冻融3次）；
u 运输：采用**或泡沫箱加冰密封进行运输。
本公司产品仅用于科研。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。
组成及试剂配制:
1、 酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆转录）反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）
2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
C16 Galactosylceramide (d18:1/16:0) 250mg CD3G Protein 10mg
Gestodene 5mg Fmoc-Ile-Wang resin 100g
RIPK1-IN-4 5g Sarafloxacin HCl 5mg
N,N-Dimethylpentylone (hydrochloride) 5mg Hexaflumuron 100μg
(β-Asp??-Delta-Sleep Inducing Peptide 2? Isovaleryl-Val-Val-Sta-OEt 1mg
DEPMPO-biotin 100mg 2-hexyl-4-Pentynoic Acid 25μg
UoS 12258 10mg Zosuquidar 1mg
Pregnanediol 10mg Endostatin (84-114)-NH2 (JKC367) 50mg
Calcitetrol 10mg Ercalcitriol 1mg
D-chiro-Inositol 5mg 1,3-Di-(9E)-Palmitoleoyl-rac-glycerol 5g
Prochlorperazine 500μg 5,6-dihydroxy Indole 5g
1-O-Hexadecyl-sn-glycerol 10mg 3,5-DMA (hydrochloride) 1mg
ACYP1 Human 1mg AMT hydrochloride 25mg
Laetanine 10μg H-Glu-Ala-Leu-Phe-Gln-pNA 1mg
Ensulizole 1μg Nutlin-3a chiral 500μg
肠道病毒EV型(EV-)荧光-PCR法Astaxanthin Astaxanthin，一种红色的膳食类胡萝卜素，可从雨生红球藻 (Haematococcus pluvialis) 等多种海洋生物中提取得到，是过氧化物酶体增
Azaphen hydrochloride Pipofezine(Azafen,Azaphen)是5-羟色胺重吸收抑制剂。
SB-334867 free base (SB334867A free base) SB-334867游离碱是非肽类食欲肽OX1受体拮抗剂，pKb为7.2。
SGC-CBP30 SGC-CBP30 是一种有效且高度选择性的 CBP/p300 溴结构域抑制剂 (对 CBP 和 p300 的 Kd 值分别为 21 nM 和 32 nM)，其
Sitagliptin phosphate monohydrate (MK-0431 phosphate monohydrate) Sitagliptin(MK 0431)是DPP4高效抑制剂，在Caco-2细胞中IC50值为19nM。
Tamoxifen (ICI 47699; (Z)-Tamoxifen; trans-Tamoxifen) Tamoxifen (ICI 47699) 是一种选择性雌**受体调节剂 (SERM)，可阻断乳腺细胞中的雌**作用，并可激活其他细胞，如骨骼，肝脏和**细胞中
SRT2183 SRT 2183 是一种选择性 Sirtuin-1 (SIRT1) 激活剂，其 EC1.5 值为 0.36 μM。SRT 2183 诱导生长停滞和凋亡，同时伴随
SRT3025 SRT3025是一种具有口服活性的SIRT1小分子激活剂。 SRT3025能够抑制Panc-1移植瘤的肿瘤生长，尽管其效力不如体外抑制Panc-1细胞的生存能力
Caerulomycin A (Cerulomycin; Caerulomycin) Caerulomycin A (Cerulomycin; Caerulomycin) 是一种抗** (antifungal) 化合物，能够诱导 T 细胞的产生。
TAK960 TAK-960 是一种有效的，可口服的，选择性的 polo-like kinase 1 (PLK1) 抑制剂，在 10 μM ATP 的条件下，IC50 值为
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的**量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在学中zui小检出率为3个。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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