ELISA实验间接法注意事项如下：
1.应注意分离血清时，血液要求放置室温中凝固收缩，不宜置冰箱（4℃）中凝固，否则会使大部分IgM和少量IgG丧失活性。
2.为了使特异性结合的抗体量尽可能多，包被微量反应板凹孔的抗原应该稍微过量。
3.在孵育或洗涤过程中，已吸附的抗原可能有部份会从固相载体上被洗涤下来。从而使加入被检血清中的特异性抗体以外的蛋白质很可能会吸附到原来包被抗原凹孔的空白处，增加本底颜色，产生假阳性反应。
4.在稀释剂及洗涤剂中加入各种保护性阻剂可用来抑制非特异性蛋白的竞争性吸附作用。
5.在稀释剂和洗涤剂中所加的吐温-20很重要。它不仅能消除非特异性的本底反应，而且还可增加阳性标本的敏感度，这可能与吐温-20能分离所吸附的非特异性物质有关。目前采用的洗涤剂为PH7.4 PBS（含0.2‰KCL）加0.05%吐温-20，如无吐温-20，也可用吐温故-40或吐温-60代替。但吐温-80本底较高，不宜应用。