PYCARD人细胞凋亡相关斑点样蛋白ELISA方法

公司产品仅供体外研究使用，不用于临床诊断!

包装规格：液体盒装 96T/48T
保存条件：2-8℃（长期不使用时，部分试剂应放在-20℃条件下）。
有效期：6个月
存储运输：低温避光，请勿重压，轻拿轻放（现货供应，一般为快递运输，江浙沪隔天到，外地及偏远地方三至五天时间到货。）
Elisa试剂盒可测种属：人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。
Elisa试剂盒适用范围：此试剂盒仅用于科研实验，禁用于临床。
样本要求：
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

组成及试剂配制 :
1. 酶联板：一块(96孔) 
2. 标准品(冻干品)：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制50 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液：1×20ml/瓶。
4. 检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5. 检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6. 检测溶液A：1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100ul/孔)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul检测溶液A加990ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液B：1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 
9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 
10. 终止液：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

样本收集及储存：
1. 细胞培养上清：
将细胞培养基移至无菌离心管，在 4℃条件下 1000 ×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。
2. 血清样本：
室温血液自然凝固 20 min 后，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），保存过程中如有沉淀，请再次离心，避免反复冻融。
3. 血浆样本：
将全血收集到含抗血凝剂的管中，根据标本的实际要求选择 EDTA，柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 20 min，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。
猴糖化蛋白(GSP)酶联吸附测定试剂盒  松鼠葡萄球NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb

猴凋亡蛋白酶激活因子1(APAF-1)酶联吸附测定试剂盒  Pseudomonas batumici Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb (HRP Conjugate)

猴β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)酶联吸附测定试剂盒 少孢哈萨克斯坦酵母Phospho-Histone H2B (Ser14) (D67H2) Rabbit mAb

猴补体片段3b受体(C3bR)酶联吸附测定试剂盒  玫烟色棒束孢Toll-like Receptor 3 (D10F10) Rabbit mAb

猴强啡肽(Dyn)酶联吸附测定试剂盒 Bacillus sp.Mis18-α (D3N2X) Rabbit mAb

猴磷脂爬行酶2(PLSCR2)酶联吸附测定试剂盒海假交替单胞CD11c (3.9) Mouse mAb (FITC Conjugate)

猴低氧上调节因子1(HYOU1)酶联吸附测定试剂盒 多主葡萄壳Phospho-ALK (Tyr1096) (D96H9) Rabbit mAb

猴雄诱导蛋白1(AIG1)酶联吸附测定试剂盒 芽胞杆Phospho-EGF Receptor (Tyr845) (D63B4) Rabbit mAb

猴XV 型胶原(COL15)酶联吸附测定试剂盒 多粘类芽孢杆Bmi1 (D20B7) XP® Rabbit mAb

猴白分化抗原CD40配体(CD40L/TNFSF5)酶联吸附测定试剂盒金黄色葡萄球金黄亚种Bmi1 (D20B7) XP® Rabbit mAb

猴雌诱导蛋白PS2 (EIPS2)酶联吸附测定试剂盒酿酒酵母Phospho-ATM/ATR Substrate Motif [(pS/pT) QG] MultiMab™ Rabbit mAb mix

猴凝血因子Ⅻ(F12)酶联吸附测定试剂盒  枯草芽孢杆Phospho-PKC Substrate Motif [(R/K)XpSX(R/K)] MultiMab™ Rabbit mAb mix

猴集蛋白亚家族成员11(COLEC11)酶联吸附测定试剂盒 鸡新城疫病血凝抑制试验（HI）阳性血清HCFC1 Antibody (Amino-terminal Antigen)

猴TATA框结合蛋白相关因子2(TAF2)酶联吸附测定试剂盒黑曲霉α-Actinin (E7U1O) Mouse mAb

猴生长因子受体结合蛋白2(Grb2)酶联吸附测定试剂盒黄杆Rab8A (D22D8) XP® Rabbit mAb
PYCARD人细胞凋亡相关斑点样蛋白ELISA方法DNA甲基转移酶相关蛋白1抗体Human TRIO (Triple functional domain protein) ELISA KIT人磷酸甘油酸变位酶2（PGAM2）ELISA试剂盒,PGAM2 ELISA

减数分裂同源蛋白DMC1抗体Human SUPT5H (Transcription elongation factor SPT5) ELISA KIT人磷酯酶C（PLC）ELISA试剂盒, PLC ELISA

DNA连接酶3抗体Human DAO(D-amino-acid oxidase) ELISA Kit人葡萄糖激酶（GCK）ELISA试剂盒,

磷酸化DNA依赖性蛋白激酶抗体Human TPRA1 (Transmembrane protein adipocyte-associated 1 homolog) ELISA KIT人硫氧还蛋白还原酶（TrxR）ELISA试剂盒,

磷酸化DNA依赖性蛋白激酶抗体Human TMPPE (Transmembrane protein with metallophosphoesterase domain) ELISA KIT人芳基硫酸酯酶A（ASA）ELISA试剂盒,

DNA聚合酶δ2/DNA pol δ 2抗体Human IGFLR1 (IGF-like family receptor 1) ELISA KIT人L苯丙氨酸解氨酶（PAL）ELISA试剂盒,

DNA聚合酶δ催化亚单位/DNA pol δ cat抗体Human TRAF3IP3 (TRAF3-interacting JNK-activating modulator) ELISA KIT大鼠一氧化氮合成酶（NOS）ELISA试剂盒,

DNA聚合酶η抗体Human TBKBP1 (TANK-binding kinase 1-binding protein 1) ELISA KIT大鼠抗心磷脂抗体IgG（ACA-IgG）ELISA试剂盒,
操作步骤：
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.         加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.         弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.         温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.         每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液）100μl，37℃，60分钟。
5.         温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.         依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.         依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.         用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。