eNOS人内皮型一氧化氮合成酶ELISA方法

公司产品仅供体外研究使用，不用于临床诊断!

包装规格：液体盒装 96T/48T
保存条件：2-8℃（长期不使用时，部分试剂应放在-20℃条件下）。
有效期：6个月
存储运输：低温避光，请勿重压，轻拿轻放（现货供应，一般为快递运输，江浙沪隔天到，外地及偏远地方三至五天时间到货。）
Elisa试剂盒可测种属：人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。
Elisa试剂盒适用范围：此试剂盒仅用于科研实验，禁用于临床。
样本要求：
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

组成及试剂配制 :
1. 酶联板：一块(96孔) 
2. 标准品(冻干品)：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制50 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液：1×20ml/瓶。
4. 检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5. 检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6. 检测溶液A：1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100ul/孔)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul检测溶液A加990ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液B：1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 
9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 
10. 终止液：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

样本收集及储存：
1. 细胞培养上清：
将细胞培养基移至无菌离心管，在 4℃条件下 1000 ×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。
2. 血清样本：
室温血液自然凝固 20 min 后，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），保存过程中如有沉淀，请再次离心，避免反复冻融。
3. 血浆样本：
将全血收集到含抗血凝剂的管中，根据标本的实际要求选择 EDTA，柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 20 min，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。
绵羊脱氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S)酶联吸附测定试剂盒 孢小克银汉霉轮生变种Mouse PI3K2a (Phosphoinositide 3 Kinase 2a) ELISA Kit  

绵羊粘蛋白4(MUC4)酶联吸附测定试剂盒大豆慢生根瘤Mouse PLA1 (Phospholipase A1) ELISA Kit  

绵羊桩蛋白(Pax)酶联吸附测定试剂盒类干酪乳杆Mouse PLAA (Phospholipase A1 Activating Protein) ELISA Kit  

绵羊甲状腺激球蛋白(TSI)酶联吸附测定试剂盒假单胞Mouse LDLR (Low Density Lipoprotein Receptor) ELISA Kit

绵羊球蛋白G Fc段结合蛋白(FcγBP)酶联吸附测定试剂盒 氧化葡糖杆Mouse PLCg1 (Phospholipase C Gamma 1) ELISA Kit  

绵羊磷脂酰肌蛋白聚糖4(GPC4)酶联吸附测定试剂盒 酮丁梭Mouse PI3K (Phosphotylinosital 3 kinase) ELISA Kit

绵羊胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)酶联吸附测定试剂盒无花果曲霉Mouse PEDF (Pigment Epithelium Derived Factor) ELISA Kit

绵羊葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)酶联吸附测定试剂盒 蓝灰色异壁放线Mouse PIR (Pirin) ELISA Kit

绵羊神经降压素(NT)酶联吸附测定试剂盒 Leucostoma niveumMouse PACAPR1 (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide Receptor 1) ELISA Kit  

绵羊蛋白激酶C-γ(PKCγ)酶联吸附测定试剂盒异常汉逊酵母异常变种Mouse PACAP (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide) ELISA Kit

绵羊β肌动蛋白(β-actin)酶联吸附测定试剂盒 蜡样芽胞杆Mouse PGF (Placental Growth Factor) ELISA Kit

绵羊小表皮粘蛋白(SBEM)酶联吸附测定试剂盒葡萄状穗霉属Mouse PKP2 (Plakophilin 2) ELISA Kit  

绵羊血管内皮生长因子C(VEGF-C)酶联吸附测定试剂盒炭黑曲霉Mouse PAP (Plasmin-Antiplasmin Complex) ELISA Kit

绵羊硫酸软骨素(CS)酶联吸附测定试剂盒  肠杆属Mouse PAI-1 (Plasminogen Activator Inhibitor 1) ELISA Kit

绵羊FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)酶联吸附测定试剂盒 侵染链格孢Mouse PAI-2 (Plasminogen Activator Inhibitor 2) ELISA Kit  
eNOS人内皮型一氧化氮合成酶ELISA方法组蛋白乙酰转移酶MOF抗体Human NOC4L ELISA Kit联苯盐酸盐

间质蛋白抗体Human NOB1 ELISA Kit反二酸

肌球蛋白轻链3抗体Human NOD2(Nucleotide-binding oligomerization domain-containing protein 2) ELISA Kit铋酸钠

多药耐药蛋白/P-糖蛋白抗体Human HSP90B1(Endoplasmin) ELISA Kit谷氨酸脱羧酶-65抗体流式组化

同源结构蛋白1抗体Human NOC4L ELISA Kit硒

增殖诱导蛋白5/肺癌相关蛋白10抗体Human NINJ2 (Ninjurin-2) ELISA Kit正十五烷

肌钯蛋白抗体Human NIPBL ELISA KitDL-丙氨酸甲酯盐酸盐

肌管素相关蛋白2抗体Human HP(Haptoglobin) ELISA KitN-乙酰-L-丙氨酸
操作步骤：
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.         加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.         弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记���体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.         温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.         每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液）100μl，37℃，60分钟。
5.         温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.         依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.         依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.         用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

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