冷冻保存细胞之方法?
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
产品名称
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大鼠少突胶质细胞
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规格
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详见说明书
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货号
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BH-8010825
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细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
人干扰素可诱导蛋白AIM2 ELISA试剂盒 人 96T 0.312-20 ng/mL
ELISA Kit for Human Interferon-inducible protein AIM2
人金属肽酶含血小板反应蛋白5(ADAM-TS 5)ELISA试剂盒 人 96T 0.156-10 ng/mL
ELISA Kit for Human A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5
人δ氨基乙酰丙酸脱水酶(ALAD)ELISA试剂盒 人 96T 1.56-100 ng/mL
ELISA Kit for Human Delta-aminolevulinic acid dehydratase
人血管**素样蛋白4(ANGPTL4)ELISA试剂盒 人 96T 0.156-10 ng/mL
ELISA Kit for Human Angiopoietin-related protein 4
人金属肽酶含血小板反应蛋白9(ADAMTS9) ELISA试剂盒 人 96T 0.156-10 ng/mL
L-丙氨酸乙酯盐酸盐
英文名称:L-Alanine ethlester hydrochloride;L-Ethyl 2-aminopropanoate hydrochloride;Ethyl L-alaninate hydrochloride
其他名称:L-丙氨酸合乙酯盐酸盐;L-丙胺酸乙酯盐酸盐
CAS号:1115-59-9
C5H11NO2·HCl =153.61
级别:BR
含量:≥98.5%
比旋光度:+2.9°±0.5(C=2.5 in H2O)
熔点:~62℃
性状(以下信息仅供参考):白色至类白色结晶粉末
用途:本品仅供科研,不得用于其它用途
保存:RT
ELISA Kit for Human A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 9
L-精氨酸
英文名称:L-Arginine;L-1-Amino-4-guanidovaleric acid;L-2-Amino-5-guanidinovaleric acid;L-α-Amino-δ-guanidovaleric acid;L-Guanidine aminovaleric acid;Nδ-Amidino-L-ornithine
其他名称:2-氨基-5-胍基戊酸;L-蛋白氨基酸;L-胍基戊氨酸;L-2-氨基-胍基戊酸
CAS号:74-79-3
C6H14N4O2=174.2
级别:BR
含量:≥98.0%
比旋光度:26.9~27.9º
PH:10.5~12.0
氯化物:≤0.02%
铵盐:≤0.02%
硫酸盐:≤0.02%
铁:≤10ppm
重金属:≤10ppm
砷盐:≤1ppm
干燥失重:≤0.5%
灼烧残渣:≤0.1%
性状(以下信息仅供参考):白色结晶粉末或棱形结晶,从乙醇中析出的为无水单斜片状结晶。溶于水,微溶于乙醇,不溶于乙迷。具强碱性,水溶液能从空气中吸收二氧化碳。水中溶解度: 148.7 g/l (20°C)
用途:本品仅供科研,不得用于其它用途。(以下用途仅供参考)一氧化氮合成酶底物,能转换为瓜氨酸和NO。靠一种依赖于NO的机制诱导胰岛素分泌
保存:RT
人乙醛脱氢酶2(ALDH2)ELISA试剂盒 人 96T 0.312-20 ng/mL
ELISA Kit for Human Aldehyde dehydrogenase, mitochondrial
人载脂蛋白C2(Apo C2)ELISA试剂盒 人 96T 3.12-200 ng/mL
ELISA Kit for Human Apolipoprotein C-II
人载脂蛋白B(Apo-B)ELISA试剂盒 人 96T 78-5000 ng/mL
ELISA Kit for Human Apolipoprotein B-100
人β抑制蛋白2(ARRB2)ELISA试剂盒 人 96T 0.312-20 ng/mL
ELISA Kit for Human Beta-arrestin-2
人金属肽酶含血小板反应蛋白1(ADAMTS1) ELISA试剂盒 人 96T 1.56-100 ng/mL
ELISA Kit for Human A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 1
大鼠少突胶质细胞人金属肽酶含血小板反应蛋白7(ADAMTS7)ELISA试剂盒 人 96T 0.156-10 ng/mL
ELISA Kit for Human A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 7
人12-脂氧化酶/脂加氧酶(LOX-12)ELISA试剂盒 人 96T 0.156-10 ng/mL
ELISA Kit for Human Arachidonate 12-lipoxygenase, 12S-type
细胞处理方法:
以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考,具体操作还需要根据到货时细胞密度,细胞生长状态等具体情况,酌情处理,如需要更详细技术指导。
一.贴壁细胞
客户接收到细胞,用75%的酒精(建议配制75%酒精的水是过的)培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
显微镜观察细胞,当细胞融汇至80%左右(可以传代的情况下),细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度,培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。1000rpm,5min离心,重悬细胞。换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2 培养。
二.悬浮细胞
1. 接收到细胞,用75%的酒精(建议配制75%酒精的水是过的)培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
3. 严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒)。
5. 1000rpm,5min离心,重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基,37℃,5%CO2 培养。
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