兔冠状动脉平滑肌细胞

培养方法

传代方法 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

生长条件 37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

存储条件 冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

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培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米��照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

Tissue Specificity : Testis-specific (at protein level). Highly expressed in cytoplasm of step 2 round spermatids. Detected in the middle piece and extends to about half the principal piece of the sperm tails.

Post-translational modifications : Tyrosine phosphorylated (By similarity).

Similarity : Belongs to the ODF2 family.

Database links : NCBI Reference Sequence: NP_002531.3

英文名称  Anti-OST-beta

中文名称  有机溶质转运蛋白OSTβ抗体

别    名  organic solute transporter beta (Ostbeta); Organic solute transporter subunit beta; Ostbeta; Ost beta; OST-beta; OSTB; OSTB_HUMAN.

浓    度  1mg/1ml

规 格  0.2ml/200μg

抗体来源  Rabbit  

克隆类型  polyclonal

交叉反应  Human, Mouse, Rat

产品类型  一抗    

研究领域  细胞生物 **学 通道蛋白  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 14kDa

性    状  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human OST-beta

亚    型  IgG
兔冠状动脉平滑肌细胞Toll样受体9检测试剂盒乙二乙 分析标准品, ≥99.8% (GC)水质苯标样 浓度范围:0.9,2.01(mg/L)，分析标准品

Twist相关蛋白1检测试剂盒硬酯酸乙酯 97%苯 MDI级,≥99.98%(GC)

Twist转录因子检测试剂盒固蓝RR盐 AR苯乙烯 Standard for GC，>99.5%（GC)

T**亚群检测试剂盒叶酸 分析标准品，≥98%苯乙烯 CP,含10-15ppm 4-叔-丁基邻苯二酚稳定剂

T**亚群检测试剂盒固蓝B 90%苯乙烯 99%,含10-15ppm 4-叔-丁基邻苯二酚稳定剂

T**球蛋白粘蛋白分子3检测试剂盒高铁试剂 98.5%苯乙烯 分析标准品

UL16结合蛋白-1检测试剂盒固蓝BB盐 AR苯乙烯标准溶液 1000μg/ml，溶剂：二硫化碳

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。