小鼠表皮干细胞

培养方法

传代方法 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

生长条件 37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

存储条件 冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

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培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

产品介绍 Ras p21 can exist in either a physiologically quiescent GDP-binding state or a GTP-binding signal-emitting state (1,2). Interaction of Ras p21 with GTPase activating protein (GAP) can increase the rate of hydrolysis of Ras p21-bound GTP by as much as 1000-fold (3). In mitogenically activated and tyrosine kinase-transformed cells, Ras GAP forms a complex with a protein designated p190 (4). At its amino terminus, p190 contains sequence motifs characteristic of all known GTPases, whereas the carboxy terminus contains sequences similar to those found in the Bcr gene product, n-chimerin and Rho GAP, all of which exhibit intrinsic GAP activity (4,5). Oligophrenein-1 is an additional protein with GTPase activating activity. Oligophrenein-1 is a RhoGAP protein that stimulates GTP hydrolysis of Rho subfamily members and is involved in cell migration, morphogenesis and axon outgrowth (6).

Function : Stimulates GTP hydrolysis of members of the Rho family. Could activates GTPase targets that are known to affect cell migration and outgrowth of axons and dendrites.

Subunit : Interacts with HOMER1. Interacts with AMPA receptor complexes. Interacts with SH3GL2 (endophilin-A1)

Subcellular Location : Cell junction, synapse. Cell projection, axon. Cell projection, dendritic spine. Note=Present in both presynaptic and postsynaptic sites

Tissue Specificity : Expressed in brain.

DISEASE : Defects in OPHN1 are the cause of mental retardation X-linked OPHN1-related (MRXSO) [MIM:300486]; formerly designated MRX60. MRXSO is a syndromic mental retardation. Patients present mental retardation associated with cerebellar hypoplasia and distinctive facial dysmorphism.

Similarity : Contains 1 PH domain.

Contains 1 Rho-GAP domain.

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: O60890.1

英文名称  Anti-Orexin Prepro

中文名称  食欲素前体蛋白OX抗体

别    名  HCRT; Hypocretin; OX; PPORX; PPOX; Prepro orexin; OREX_HUMAN; Orexin; Hcrt; Hypocretin-1; Hcrt1; Orexin-B; Hypocretin-2; Hcrt2.

浓    度  1mg/1ml

规 格  0.2ml/200μg

抗体来源  Rabbit  

克隆类型  polyclonal

交叉反应  Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep

产品类型  一抗    
小鼠表皮干细胞成熟BNP检测试剂盒α-氧代-2-呋喃乙酸 97%人参皂甙 Re 分析标准品，>98%

成熟促进因子检测试剂盒奥美拉唑人参皂苷Rh1 分析标准品，≥98%

成纤维活化蛋白检测试剂盒对羟基联苯 分析标准品,用于环境分析人参皂苷Rf 分析标准品，≥98%

成纤维生长因子检测试剂盒棕榈酸棕榈酯 98%人参皂苷Rb3 分析标准品，≥98%

成纤维生长因子10检测试剂盒棕榈酸棕榈酯 95%异酸正丁酯 98%

成纤维生长因子19检测试剂盒蓝五号钠盐 80%乙酸异烯酯 99%

成纤维生长因子21检测试剂盒聚（甲基乙烯基共聚马来酸） Mw ~216,000 to ~80,000, powder印刷胶带,用于封装纸箱,60m*60mm*0.057mm

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。