冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
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产品名称
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兔**管内皮细胞
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规格
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详见说明书
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货号
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BH-8010780
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细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
大黄酚4-Boc-1-乙lamin A 核纤层蛋白A抗原
芦荟大黄素4-Boc-1-乙LOX-1/OLR1 凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体
MRSA显色培养基杨梅素3,5-二代苯(含有数量不等的酐)LPLUNC1 人鼻咽癌癌基因多肽抗原
二氢杨梅素3,5-二代苯(含有数量不等的酐)LYVE-1(lymphalic vessel endotheilial hyaluronan receptor 1) **管内皮透明质受体抗原
李斯特菌显色培养基阿魏3,5-二代苯(含有数量不等的酐)ACE( ACE, testis-specific isoform precursor) 血管紧张素转换酶(抗原)
白藜芦1-溴-4-乙氧基-2,3-二苯Integrin alpha E2 peptide 整合素alpha E2抗原
李斯特菌鉴定显色培养基虎杖苷（白藜芦苷）1-溴-4-乙氧基-2,3-二苯Mac-1 (Mac-1/CR3/CD11b+CD18) 巨噬表面分子抗原
弧菌显色培养基薄荷(S)-(-)-2-甲基-1-丁Mafa(avian)(V-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog A) v-maf 肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A抗原
丹皮酚(S)-(-)-2-甲基-1-丁MAGE-1 黑色素瘤相关
沙门氏菌显色培养基丹酚A(S)-(-)-2-甲基-1-丁MAPKK1 (MAP kinase kinase 1) 丝裂原活化蛋白激酶激酶1抗原
丹酚B双酚A甘油酯ASK1/MAPKKK5 凋亡信号调节激酶1/丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶5抗原
沙门氏+菌显色培养基丹参IIA6-甲氧基萘-2-Maspin (mammary serine protease inhibitor) 抑癌基因抗原
丹参IIA-磺钠6-甲氧基萘-2-Matriptase 蛋白裂解酶（一种新的癌基因）抗原
VRE显色培养基丹参I3-苄氧基苯HCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene) 人巨病UL49抗原
假单胞菌显色培养基二氢丹参Ⅰ3-苄氧基苯MC-1R (melanocortin-1-receptor) 黑皮质素-1受体抗原
隐丹参3-苄氧基苯Mcl-1(myeloid cell leukemia 1) peptide 髓样白血病-1抗原
B群链球菌显色培养基丹参素钠2-乙基-4-甲基噻唑MDM2 (urine double minute 2) 双微体2癌基因抗原
ESBL显色培养基冬凌草甲素2-异基-4-甲基噻唑MDR1(multidrug resistance 1) 多药耐药蛋白抗原
KPC显色培养基辅酶Q102-异基-4-甲基噻唑MEF2(myocyte enhancer-binding factor 2) 肌增强因子2抗原
CTX-M显色培养基防己（汉防己甲素）2,6-二氨基-4-嘧Mfn1 (Mitofusin1) 线粒体融合蛋白1
Agar 琼脂防己诺林（汉防已乙素）2,6-二氨基-4-嘧MT(metallothionein) 金属硫蛋白抗原
兔**管内皮细胞Agar 琼脂鬼臼素3-氨基-1-MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor) 层粘连蛋白受体1抗体
L-Arginine L-精氨葛根素3-氨基-1-MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor)(CT) 层粘连蛋白受体1抗原（C端）
L-Aspartic acid L-天门冬氨黄芪总皂苷LicofeloneMK(Midkine) 中期因子/肝素结合生长因子抗原
细胞处理方法：
以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考，具体操作还需要根据到货时细胞密度，细胞生长状态等具体情况，酌情处理，如需要更详细技术指导。
一．贴壁细胞
客户接收到细胞，用75%的酒精（建议配制75%酒精的水是过的）培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。
显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2 培养。
二．悬浮细胞
1. 接收到细胞，用75%的酒精（建议配制75%酒精的水是过的）培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。
3. 严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒）。
5. 1000rpm,5min离心，重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2培养。
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