冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
产品名称
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小鼠前列腺癌细胞
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规格
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1×106
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货号
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BH-X019691
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细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
(石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
保存条件 Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
Important Note This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
产品介绍 Expression of the POU-domain transcription factor Octamer-4 (Oct-4) is widely regarded as a hallmark of pluripotent stem cells. The relationship of Oct-4 to pluripotent stem cells is indicated by its tightly restricted expression to undifferentiated pluripotent stem cells. Upon differentiation to somatic lineages, the expression of Oct-4 disappears rapidly. Unlike the majority of pluripotent stem cell markers, the biological role of Oct-4 has been well characterized. Studies performed in mice point to the critical role of Oct-4 in the establishment and/or maintenance of pluripotent stem cells in an uncommitted state.
Function : Transcription factor that binds to the octamer motif (5'-ATTTGCAT-3'). Forms a trimeric complex with SOX2 on DNA and controls the expression of a number of genes involved in embryonic development such as YES1, FGF4, UTF1 and ZFP206. Critical for early embryogenesis and for embryonic stem cell pluripotency.
Subunit : Interacts with UBE2I and ZSCAN10 (By similarity). Interacts with PKM2. Interacts with WWP2.
Subcellular Location : Cytoplasm.Nucleus.Note=Expressed in a diffuse and slightly punctuate pattern.
Tissue Specificity : Expressed in developing brain. Highest levels found in specific cell layers of the cortex, the olfactory bulb, the hippocampus and the cerebellum. Low levels of expression in ***** tissues.
Post-translational modifications : Sumoylation enhances the protein stability, DNA binding and transactivation activity. Sumoylation is required for enhanced YES1 expression (By similarity).
Ubiquitinated; undergoes 'Lys-63'-linked polyubiquitination by WWP2 leading to proteasomal degradation (By similarity).
ERK1/2-mediated phosphorylation at Ser-111 promotes nuclear exclusion and proteasomal degradation. Phosphorylation at Thr-235 and Ser-236 decrease DNA-binding and alters ability to activate transcription.
Similarity : Belongs to the POU transcription factor family. Class-5 subfamily.
Contains 1 homeobox DNA-binding domain.
小鼠前列腺癌细胞抗乙型肝炎病表面抗体检测试剂盒棕榈酸乙酯 ≥98%, FG吲哚 99%
抗载脂蛋白抗体A1检测试剂盒肉桂酸乙酯 98%吲哚 ≥99%, FCC, Kosher
抗中性粒胞浆抗体检测试剂盒肉桂酸乙酯 99%异丁酯 99%
抗中性粒核周抗体检测试剂盒戊酸乙酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)异丁香酚(正+反) 97%
抗中性粒抗体检测试剂盒戊酸乙酯 98%乙酰基异丁香酚 ≥98%, FCC
抗中性粒抗体检测试剂盒菠萝酸乙酯 99%乙酸异龙脑酯 90%
颗粒酶B检测试剂盒乳酸乙酯 standard for GC,≥99.0% (GC) 乙位紫罗兰酮 97%
细胞处理方法:
以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考,具体操作还需要根据到货时细胞密度,细胞生长状态等具体情况,酌情处理,如需要更详细技术指导。
一.贴壁细胞
客户接收到细胞,用75%的酒精(建议配制75%酒精的水是过的)培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
显微镜观察细胞,当细胞融汇至80%左右(可以传代的情况下),细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度,培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。1000rpm,5min离心,重悬细胞。换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2 培养。
二.悬浮细胞
1. 接收到细胞,用75%的酒精(建议配制75%酒精的水是过的)培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
3. 严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒)。
5. 1000rpm,5min离心,重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基,37℃,5%CO2培养。