猪肾细胞系

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

培养方法

传代方法 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

生长条件 37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

存储条件 冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

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培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

Function : Pumilio 2, a human homolog of Pumilio, a protein required to maintain germ line stem cells in Drosophila and Caenorhabditis elegans, forms a stable complex with DAZ through the same functional domain required for RNA binding, protein-protein interactions and rescue of Pumilio mutations in flies. Pumilio 2 is expressed predominantly in human embryonic stem cells and germ cells and colocalizes with DAZ and DAZL in germ cells. Pumilio 2 is a component of conserved cellular machinery that may be required for germ cell development.

Subunit : Homodimer; homodimerizes in vitro. Interacts with DAZ, DAZL and NANOS1 via its pumilio repeats. Binds to a RNA consensus sequence, that is related to the Nanos Response Element (NRE), a 16 bp sequence found in the 3'-UTR of the Drosophila hb mRNA. Also binds to the NRE. Interacts with NANOS3 (By similarity). Interacts with SNAPIN.

Subcellular Location : Cytoplasm (Probable). Cytoplasmic granule (By similarity). Cytoplasm, perinuclear region. Note=The cytoplasmic granules are stress granules which are a dense aggregation in the cytosol composed of proteins and RNAs that appear when the cell is under stress. Co-localizes with NANOS3 in the stress granules (By similarity). Co-localizes with NANOS1 and SNAPIN in the perinuclear region of germ cells.

Tissue Specificity : Expressed in male germ cells of  germ cells. Expressed at lower level in brain, heart, kidney, liver, muscle, placenta, intestine and stomach Expressed in cerebellum, corpus callosum, caudate nucleus, hippocampus, medulla oblongata and putamen. Expressed in all fetal tissues tested.

Similarity : Contains 1 PUM-HD domain.

Contains 8 pumilio repeats.

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: Q8TB72.2

英文名称  Anti-PSMA4

中文名称  蛋白酶体PSMα4/20S Proteasome α4抗体

别    名  HC9; HsT17706; Macropain subunit C9; MGC111191; MGC12467; MGC24813; Multicatalytic endopeptidase complex subunit C9; Proteasome (prosome macropain) subunit alpha type 4; Proteasome alpha 4 subunit; Proteasome component C9; Proteasome subunit alpha type 4; Proteasome subunit alpha type-4; Proteasome subunit HC9; Proteasome subunit L; PSA4_HUMAN; PSC9; PSMA 4; psmA4.

浓    度  1mg/1ml

规 格  0.2ml/200μg

抗体来源  Rabbit  

克隆类型  polyclonal

交叉反应  Human, Mouse, Rat, Pig, Horse, Monkey   

产品类型  一抗    

研究领域  细胞生物 泛素  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 29kDa
猪肾细胞系神经营养因子3检测试剂盒溴水 ACS, 99.5%邻甲酚 99%

神经营养因子4检测试剂盒苄基基溴化铵 98%间甲酚 99.7%，无色

神经元特异性烯化酶检测试剂盒铬酸钡 AR,98.0%间甲酚  Standard for GC,≥99.7%(GC)

蛋白检测试剂盒双环己酮草酰二腙 AR间甲酚 CP

肾上腺素检测试剂盒双环己酮草酰二腙 98.0%间甲酚  >99.0% (GC)

肾上腺素能a1A受体检测试剂盒溴素 AR，99.5%间甲酚  >98.0%(GC)

肾上腺髓质素检测试剂盒二硫化碳 ACS, ≥99.9%间甲酚 分析标准品