EBV 转化的绒猴白细胞

培养方法

传代方法 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

生长条件 37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

存储条件 冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

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培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

研究领域  细胞生物 发育生物学 干细胞  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 119kDa

性    状  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from Human PMFBP1

亚    型  IgG

纯化方法  affinity purified by Protein A

储 存 液  Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

产品应用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500

（石蜡切片需做抗原修复）

 not yet tested in other applications.

 optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.  

保存条件  Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

Important Note  This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

产品介绍 PMF-1 is a 205 amino acid protein involved in kinetochore formation. Localized to the nucleus, PMF-1 contains a coiled-coil domain which interacts with the leucine-zipper domain of Nrf2. This interaction regulates the transcription of SSAT, a regulatory enzyme for polyamine catabolism. PMF-1 is also a component of the MIS12 complex, which is required for kinetochore formation and chromosomal alignment and segregation. PMF-1 is expressed at highest levels in skeletal muscle and heart, with moderate expression in liver and kidney. PMFBP1 (Polyamine-modulated factor 1-binding protein 1) is a 1022 amino acid protein that binds PMF-1 and may be involved in general organization of the cytoskeleton. Due to evidence that PMFBP1 may play a role in sperm tail morphology, it may therefore affect fertility. There are three isoforms of PMFBP1 that are produced as a result of alternative splicing events.

Function : May play a role in sperm morphology especially the sperm tail and consequently affect fertility. May also be involved in the general organization of cellular cytoskeleton.Target information above from: UniProt accession Q8TBY8 The UniProt Consortium The Universal Protein Resource (UniProt) in 2010 Nucleic Acids Res. 38:D142-D148 (2010).

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: Q8TBY8.1

英文名称  Anti-PBX3

中文名称  B细胞白血病前体蛋白转录因子3抗体
EBV 转化的绒猴白细胞视黄结合蛋白检测试剂盒异辛 standard for GC, ≥99.5% (GC)黄色氧化铅 99.999% metals basis

视黄结合蛋白4检测试剂盒异辛 AR2-氨基-3,4-二甲酸 98%

视黄酸检测试剂盒异辛 CP反式-(1R,2R)-2-氨基环戊盐酸盐 97%

视锥蛋白样蛋白1检测试剂盒异辛  >99.0%(GC)反式-(1S,2S)-2-氨基环戊盐酸盐 98%

嗜铬粒蛋白A检测试剂盒异辛 分析标准品，≥99.5%顺式-(1R,2S)-2-氨基环戊盐酸盐 98%

嗜环蛋白;亲环素A检测试剂盒苯甲酸乙酯 GCS,>99.5%(GC)3-氨基巴豆酸甲酯 97%

嗜环蛋白;亲环素B检测试剂盒苯甲酸乙酯 AR,99%(S)-3-氨基-1,2- 98%

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。