狗肾转化细胞

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

培养方法

传代方法 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

生长条件 37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

存储条件 冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

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培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

英文名称  Anti-PTCHD2/DISP3

中文名称  多通道膜蛋白PTCHD2抗体

别    名  DISP3; Dispatched, drosophila, homolog of, 3; G630052C06Rik; hCG_24779; KIAA1337; Patched domain-containing protein 2; Protein dispatched homolog 3; Ptchd2; PTHD2_HUMAN; RGD1305820; RND-type protein RNDEu-2; RNDEu-2; patched domain containing 2; RP23-157B15.1.

浓    度  1mg/1ml

规 格  0.2ml/200μg

抗体来源  Rabbit  

克隆类型  polyclonal

交叉反应  Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse

产品类型  一抗    

研究领域  肿瘤 心血管 细胞生物 神经生物学 信号转导 通道蛋白 新陈代谢 细胞膜蛋白  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 153 kDa

性    状  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from Human PTCHD2/DISP3

亚    型  IgG

纯化方法  affinity purified by Protein A

储 存 液  Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

产品应用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  Flow-Cyt=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500

（石蜡切片需做抗原修复）
狗肾转化细胞肽聚糖检测试剂盒四氢糠 99%6-羟基-2-吡啶羧酸 97%

碳酸酐酶2检测试剂盒四甲基溴化铵 ARN-(2-羟乙基)哌 98%

碳酸酐酶9检测试剂盒甲苯二异酸酯 98%（剧品）2-羟基苯酸 97%

碳酸酐酶Ⅵ检测试剂盒甲苯二异酸酯 Standard for GC（剧品）2-羟基 99%

羰基化蛋白检测试剂盒苯硫酚 99%（剧品）2-基苯酚 95%

糖聚糖检测试剂盒四甲基溴化铵 离子对色谱级，≥99.0% (AT)(R)-(-)-5-羟甲基-2-吡咯烷酮 99%

糖化血红蛋白A1c检测试剂盒四甲基溴化铵 ACS, ≥98.0%(S)-(+)-5-羟甲基-2-吡咯烷酮 98%