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WB抗体试验说明

WB抗体检测某一个基因的表达产物或者要比较表达产物量的相对变化，先选方法是western blot。而Western Blot试验中比较这些的前提条件是等量的细胞上样，这样才有比较的基础。而人为的操作会产生一定的误差，这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参来校正。因此选择一个合适的内参抗体来校正上样误差是非常重要的。所以严谨的Western Blot实验设计中需要有良好的参照体系，后续的实验结果分析才具有说服性。

在Western Bloting实验中，可能内参即是内部参照(Internal Control)，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。

在Western Blotting 中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参，这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达，由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定，借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。

常用的细胞总蛋白质内参有GAPDH、beta-actin和beta-tubulin等。对于一些植物的样本，则需要特别的植物Actin蛋白作为内参，同样的，如果提取的样本是细胞核蛋白，那么PCNA或者组蛋白H3都是被经常使用的，而针对一些研究线粒体的客户，那么Cox IV则被较多的文献引用作为线粒体总蛋白的内部参考。

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