ELISA的基本原理有三条：
1、抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免yi学活性；
2、抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免yi学和酶学活性；
3、酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免yi反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
由于ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免yi学反应的基础上，因而，具有特异性。而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA法是一种既敏感又特异的方法。