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产品名称
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规格
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货号
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兔NK细胞
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详见说明书
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FS-016462
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细胞培养操作规程：
主要功能：
（1）血管平滑肌细胞的再生能力是原发血管病变的重要因素。
（2）表达钙通道及ICAM-1和VCAM-1，参与血管壁的炎症反应。
（3）与血管的进展和稳定有关。
生理变化：
（1）主动脉硬化。
（2）主动脉瘤
（3）主动脉钙化。
基本特性：
（1）组织来源于正常大鼠大动脉组织。
（2）鉴定：肌动蛋白，alpha-SMA和Desmin荧光染色。
（3）原代细胞培养末期液氮冻存。
（4）每冻存管细胞数：>5×105 cells/1ml。
（5）肌动蛋白，alpha-SMA和Desmin荧光染色验证。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、酵母。
培养步骤：
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
半胱氨酸蛋白酶1 Casp-1 Caspase 1 3.125 100 pg/mL 0.1
半胱氨酸蛋白酶3 Casp-3 Caspase 3 1.5 48 pmol/L 0.1
半胱氨酸蛋白酶8 Casp-8 Caspase 8 3.75 120 pmol/L 0.1
半胱氨酸蛋白酶9 Casp-9 Caspase 9 2 64 pmol/L 0.1
半胱氨酸蛋白酶抑制剂;胱抑素C Cys-C Cystatin C 50 1600 ng/mL 10
半乳甘露聚糖 GM Galactomannan 20 640 pg/mL 1
半乳糖凝集素1 Galectin-1 Galectin-1 1.25 40 ng/mL 0.1
半乳糖凝集素2 Galectin-2 Galectin-2 2.5 80 pg/mL 0.1
半乳糖凝集素3 Galectin-3 Galectin-3 0.5 16 ng/mL 0.1
半乳糖凝集素9 Gal-9 Galectin-9 3.125 100 pg/mL 0.1
胞浆型磷脂酶A2 cPLA2 cytosolic phospholipase A2 31.25 1000 pg/mL 1
胞外超氧化物歧化酶 SOD3 Super Oxidase Dimutase 3 10 320 U/mL 1
饱腹因子 CART cocaine- andamphetamine-regulatedtranscript 0.5 16 ng/mL 0.1
吡啶交联物 PY pyridinium crosslink;PyriLinks 0.25 8 ng/mL 0.1
表面活性蛋白A SP-A Surfactant Protein A 6.25 200 pg/mL 1
表面活性蛋白D SP-D Surfactant Protein D 2.5 80 ng/mL 0.1
表皮生长因子 EGF Epidermal growth factor 15 480 pg/mL 1
总表皮生长因子受体 T-EGFR Total epidermal growth factor receptor 1 32 ng/mL 0.1
表皮生长因子受体2 Her2 Epidermal growth factor receptor 2 0.5 16 ng/mL 0.1
丙氨酸氨基转移酶 ALT Alanine Aminotransferase 2 64 U/L 0.1
丙二醛 MDA malondialchehyche 0.25 8 nmol/mL 0.1
丙酮醛 MGO Methylglyoxal 3.75 120 ng/mL 0.1
丙酮酸激酶M2型同工酶 M2-PK Pyruvate Kinase 0.5 16 U/mL 0.1
E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體, 鼠單抗 FCM 50 µg
E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體, 鼠單抗 50 µL
E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體 (APC), 鼠單抗 FCM 25 Test
Dkk3 / REIC 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µg
Dkk3 / REIC 抗體, 兔多抗 ELISA 400 µg
E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體, 兔單抗 ELISA 50 µg
E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體, 兔單抗 IHC-P 50 µg
Nos3 / eNOS 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB 50 µg
Dkk3 / REIC 抗體, 鼠單抗 ELISA 50 µg
E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA WB IHC-P IF ICC/IF 50 µg
E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA WB IHC-P IHC-Fr 50 µg
E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體, 兔多抗 ELISA 400 µg
UCHL3 抗體, 兔單抗 ELISA 50 µg
E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 抗體, 兔單抗 WB IP 50 µg
CD16 / FCGR3 抗體, 兔單抗 FCM 50 µg
ITGA5 & ITGB1 Heterodimer 抗體, 兔單抗 ELISA 50 µg
ITGA6 & ITGB1 Heterodimer 抗體 (PE), 鼠單抗 FCM 25 Test
ITGA5 & ITGB1 抗體, 兔多抗 ELISA 400 µg
兔NK细胞TGA5 & ITGB1 抗體, 鼠單抗 IF ICC/IF 50 µg
ITGA6 & ITGB1 Heterodimer 抗體 (APC), 鼠單抗 FCM 25 Test
ITGA6 & ITGB1 Heterodimer 抗體, 兔多抗 ELISA 400 µg
操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过*易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后���能进行后续的实验。
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