兔肝外胆管上皮细胞

公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究，作为实验项目研究。

培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 

2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

产品名称以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考，具体操作还需要根据到货时细胞密度，细胞生长状态等具体情况，酌情处理，如需要更详细技术指导，请及时电话或邮件联系。

一．贴壁细胞

客户接收到细胞，用75%的酒精（建议配制75%酒精的水是过的）培养瓶外部。

肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。

显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。

严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。

用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。

1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2  培养。

二．悬浮细胞

1. 接收到细胞，用75%的酒精（建议配制75%酒精的水是过的）培养瓶外部。

2. 肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。

3. 严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒）。

5. 1000rpm,5min离心，重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2  培养。

人血清素/血清胺(ST)ELISA Kit plp

一管式病毒DNAout（200次） APES-丙酮包被液

pMAL-c5X(pMALc5X)(60908-4871y) 玉米BT176/MS PCR检测试剂盒

Ethyl green（甲基绿、双绿SF）　麦芽浸粉

中甲醛固定液（10%乙酸缓冲液） lambda NMT

大鼠β内啡肽(β-EP)ELISA Kit 人可溶瘦素受体(sLR)ELISA Kit

Blood agar base (oxoid cm55) RSC96细胞株

pAcGFP1-1(pAcGFP11)(60908-290)y pKB706

人皮肤蛋白(DPT)ELISA Kit 苦杏仁苷

人腺癌易感蛋白1(BRCA-1)ELISA Kit 传染**病毒PCR检测试剂盒

抑制与产生超氧阴离子自由基测试盒（比色法） pYES2/NT C(pYES2NTC)(60908-7060)

pLIC-EGFP (linearized) Veronal Buffered Saline with Mg++ and Ca++ (VBS++)

吐温-60 人抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)ELISA Kit

丙卡特罗 英文名称：Bin Castro hydrochloride 规格：：100mg 保存：���-20℃，避光

麦芽三糖 英文名称：Three malt sugar 规格：：100mg 保存：：-20℃，避光

兔肝外胆管上皮细胞硫酸特布他林 英文名称：Terbutaline sulfate 规格：：100mg 保存：：-20℃，避光

金诺芬 英文名称：Jin Nuofen 规格：：100mg 保存：：-20℃，避光

蒿 英文名称：Hao Jiami 规格：：100mg 保存：：-20℃，避光

尼莫地平 英文名称：Nimodipine 规格：：50mg 保存：：-20℃，避光

格列齐特 英文名称：Gliclazide 规格：：100mg 保存：：-20℃，避光

β－榄香烯 英文名称：Beta elemene 规格：：0.1ml 保存：：-20℃，避光

羟嗪 英文名称：Hydroxyzine hydrochloride 规格：：100mg 保存：：-20℃，避光

倍他司汀 英文名称：Betahistine hydrochloride 规格：：100mg 保存：：-20℃，避光

屈嗪 英文名称：Hydralazine hydrochloride 规格：：50mg 保存：：-20℃，避光