细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究,作为实验项目研究。
产品名称
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兔结肠成纤维细胞
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规格
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详见说明书
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货号
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FS-016489
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培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为玻璃**,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
细胞处理方法:
产品名称以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考,具体操作还需要根据到货时细胞密度,细胞生长状态等具体情况,酌情处理,如需要更详细技术指导,请及时电话或邮件联系。
一.贴壁细胞
客户接收到细胞,用75%的酒精(建议配制75%酒精的水是过的)培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
显微镜观察细胞,当细胞融汇至80%左右(可以传代的情况下),细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度,培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
1000rpm,5min离心,重悬细胞。换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2 培养。
二.悬浮细胞
1. 接收到细胞,用75%的酒精(建议配制75%酒精的水是过的)培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
3. 严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒)。
5. 1000rpm,5min离心,重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基,37℃,5%CO2 培养。
小鼠白介素23(IL-23)ELISA Kit pGL-3.0- control(pGL3.0control)
96孔板PCR片段纯化回收试剂盒(离心法)(5次) L-苹果酸
pPICZalpha A(pPICZa A)(60908-5540)y COX IV小鼠单抗(1000 μL)
过碘酸-苯脐-Schiff方法(PAPS)多糖染色试剂盒 pUXV5
大鼠分泌型磷脂酶A2(sPLA2)ELISA Kit Succinate Buffer(琥珀酸缓冲液),0.2M,pH4.0
Medium for halophilic archaea 人胆碱乙酰化酶(CHAc)ELISA Kit
pcDNA6.2/nGeneBLAzer-DEST(pcDNA6.2nGeneBLAzerDEST) Thermoanaerovibrio medium
人周期素依赖激酶7(CDK-7)ELISA Kit pFR-luc(pFRluc)(60908-3420)
柱式植物叶绿体DNAout 鱼促卵泡素ELISA Kit
pMCSG75 (linearized) 裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒
Csaba阿尔辛蓝沙红法特殊细胞染色试剂盒 pSM17
大鼠肌球蛋白(MYS)ELISA Kit HEPPS Buffer,0.2M,pH8.5
Desulfobulbus sp. Medium (freshwater) 人ICE蛋白酶激活因子(IRAP)ELISA Kit
萘甲唑啉 英文名称:Naphazoline hydrochloride 规格::100mg 保存::-20℃,避光
甲磺酸酚妥拉明 英文名称:Phentolamine mesylate 规格::100mg 保存::-20℃,避光
α-甲基 英文名称:Alpha methyl pyridine 规格::450mg 保存::-20℃,避光
兔结肠成纤维细胞氨基 英文名称:Aminocaproic acid 规格::300mg 保存::-20℃,避光
杨酸片(不含杨酸对照品) 英文名称:Salicylic acid tablets (do not contain salicylic acid control) 规格::20片/瓶 保存::-20℃,避光
咖因(精神药品) 英文名称:Caffeine (psychotropic drugs) 规格::1g 保存::-20℃,避光
糖精 英文名称:Saccharin 规格::1000mg 保存::-20℃,避光
双胺 英文名称:Dicyandiamide 规格::1000mg 保存::-20℃,避光
茴香酸 英文名称:Anisic Acid 规格::1g 保存::-20℃,避光
磺胺 英文名称:Sulfa 规格::1000mg 保存::-20℃,避光
非那西丁 英文名称:Phenacetin 规格::1000mg 保存::-20℃,避光
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