细胞培养操作规程:
主要功能:
(1)血管平滑肌细胞的再生能力是原发血管病变的重要因素。
(2)表达钙通道及ICAM-1和VCAM-1,参与血管壁的炎症反应。
(3)与血管的进展和稳定有关。
生理变化:
(1)主动脉硬化。
(2)主动脉瘤
(3)主动脉钙化。
基本特性:
(1)组织来源于正常大鼠大动脉组织。
(2)鉴定:肌动蛋白,alpha-SMA和Desmin荧光染色。
(3)原代细胞培养末期液氮冻存。
(4)每冻存管细胞数:>5×105 cells/1ml。
(5)肌动蛋白,alpha-SMA和Desmin荧光染色验证。
(6)不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、酵母。
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产品名称
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规格
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货号
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兔输卵管平滑肌细胞
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详见说明书
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FS-016522
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培养步骤:
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过*易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
pGMCZq17-OXOX(pGMCZq17OXOX)
核糖核酸酶A,牛胰
增强型DAB显色试剂盒
pXP112
Tris Buffered Saline(TBS),10X,high salt)
人泛素激活酶(E1/UBAE)ELISA Kit
Thermoanaerobacter subterraneus medium
pGEX-4T-1(pGEX4T1)(60908-3790)y
猪凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA Kit
酸链溶液
pSV40-CLuc(pSV40CLuc)
MES Buffered Saline,5X,pH6.5
人促卵泡素(FSH)ELISA Kit
兔输卵管平滑肌细胞印乌碱 英文名称:Printing of Aconitine 规格::HPLC≥98% 10mg/支 保存::-20℃,避光
硬飞燕草碱 英文名称:Consoline 规格::HPLC≥98% 10mg/支 保存::-20℃,避光
8-乙氧基滇乌碱 英文名称:8- ethoxy yanaconitine 规格::HPLC≥95% 10mg/支 保存::-20℃,避光
13-去羟基印乌碱 英文名称:13- to the hydroxy printing of Aconitine 规格::HPLC≥97% 10mg/支 保存::-20℃,避光
黄独素B;黄独乙素 英文名称:Diosbulbin B B; Dioscorea bulbifera 规格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
大蓟苷;柳穿鱼叶苷 英文名称:Cirsium japonicum glycoside; Linaria vulgaris leaf glycoside 规格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
一叶萩碱、一叶秋碱 英文名称:Securinine and securinine 规格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
沙苑子苷A 英文名称:Complanatoside A 规格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
穗花杉双黄酮;阿曼托黄酮 英文名称:Amentotaxus double Huang Tong; a mentor to Huang Tong 规格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
水晶兰苷;水晶兰甙 英文名称:Monotropein; monotropein 规格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
甾;固 英文名称:Ergosterol; ergosterol 规格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
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