bEnd.3 [BEND3]（小鼠脑微血管内皮细胞株）

商品属性：

产品名称	bEnd.3 [BEND3]（小鼠脑微血管内皮细胞株）	英文名称	bEnd.3 BEND
产品货号	AXB9808	培养条件	气相：95%空气+5%二氧化碳；
生长特性	贴壁生长	细胞形态	上皮细胞样
产品种属	小鼠	冻存条件	无血清冻存液，液氮储存
组织来源	脑微血管	用途	仅供科研研究实验

商品详情：

细胞别称；bEND.3; b.End3; Bend.3; bEnd3; brain-derived Endothelial cells.3；小鼠微血管内皮细胞

种属来源；小鼠

年龄性别；6周龄

组织来源；脑微血管

生长特性；贴壁生长

细胞形态；上皮细胞样

背景简介；细胞用表达多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆转录病毒转染进行转化。观察到血管性血友病因子的表达及对荧光标记的低密度脂蛋白（LDL）的摄入确认其内皮细胞特性。bEnd.3 cells细胞可用细胞因子和脂多糖(LPS)诱导细胞的Peyer＇s结高内皮细胞受体，粘膜血管定居因子(MAdCAM-1) 及内皮细胞选择素的表达。肿瘤坏死因子 a (TNF alpha), 白介素 1 (IL-1)或 LPS的诱导作用是浓度及时间依赖的。

细胞代数；10代以内

背景介绍；Bend.3细胞转染了表达多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆转录病毒载体。

生物等级；1

细胞规格；1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装

支原体检测；无

保藏机构；ATCC; CRL-2299 BCRC; 60515 ECACC; 96091929

培养基；90%DMEM+10%FBS+PS

培养条件；气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

冻存条件；无血清冻存液，液氮储存

细胞培养操作：

1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。24-48h后换液。 
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂终止消化。
c、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加1-2mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。 
3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

细胞传代培养操作步骤：
（1）当显微镜下细胞形态和生长密度达到90%时，进行传代。
（2）吸弃培养液。添加PBS清洗1~2次，摇匀后弃掉。
（3）加入覆盖瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培养瓶放入37℃培养箱进行消化，3min左右拿出，用显微镜观察细胞有无超过80%的量，发生收缩变圆、细胞间隙变大。轻轻拍打培养瓶使剩余细胞 脱落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均匀，避免消化过度。
（5）细胞悬液吸至离心管内，1000rpm/min离心3~5min。
（6）吸弃上清，加入培养液重悬细胞，吹打细胞使其均匀分散。
（7）吸弃细胞悬液，选择适合的密度接种到新培养瓶中，补充培养液并摇匀，放置37℃的CO2培养箱进行培养。
（8）根据细胞生长状态确定换液或传代时间。
（9）细胞冻存。
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