细胞培养操作：
1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。24-48h后换液。
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂终止消化。
c、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加1-2mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。
3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
商品属性：
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产品名称
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GBC-SD 人胆囊癌细胞
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英文名称
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GBC-SD:GBCSD
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产品货号
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A01X715
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培养条件
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气相：95%空气+5%二氧化碳；
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生长特性
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贴壁生长
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细胞形态
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上皮细胞样
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产品种属
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人
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冻存条件
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无血清冻存液，液氮储存
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组织来源
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胆囊癌
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用途
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仅供科研研究实验
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商品详情：
细胞别称：GBC-SD；人胆囊癌细胞
种属来源：人
年龄性别：男，61岁
组织来源：胆囊癌
生长特性：贴壁生长
细胞形态：上皮细胞样
背景简介：GBC-SD细胞株是刘博、王占民等2000年从一位61岁的男性低分化胆囊癌患者中建立的；GBC-SD细胞的形状有多边形、纺锤形和正方形；GBC-SD细胞能分泌CEA和CA19-9。GBC-SD细胞倍增时间：大约为21.4小时，可移植到裸鼠，**的��瘤与原发肿瘤相似。
生物等级：
细胞规格：1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测：无
基因表达情况：
保藏机构：KCB; KCB 201187YJ
培养基：1640+10% FBS+PS
培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
冻存条件：无血清冻存液，液氮储存
倍增时间：1640+10% FBS+PS
STR鉴定位点Amelogenin：X,Y；CSF1PO：11,11；D12S391：19,20；D13S317：8,12；D16S539：11,13；D18S51：14,21；D19S433：14,15.2；D21S11：30,31；D2S1338：17,24；D3S1358：17,17；D5S818：11,11；D6S1043：20,20；D7S820：11,12；D8S1179：10,12；FGA：23,23；Penta E：12,12；TH01：7,10；TPOX：11,11；vWA：16,17；
公司正在出售的产品：
FOXJ2蛋白抗体 FOXJ2 GTP结合蛋白SAR1B抗体 SAR1B
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腺衍生血管内皮生长因子抗体 Prokineticin 1 凝溶胶蛋白抗体 Gelsolin
突触核膜蛋白2抗体 Nesprin 2 微管蛋白β辅助因子D抗体 Beta tubulin cofactor D
8号染色体开放阅读框74抗体 C8orf74 AF594标记的单体樱桃红荧光蛋白标签抗体 mCherry, Alexa Fluor 594 conjugated
多巴胺受体D1重组兔单克隆抗体 DRD1 法尼基转移酶β-亚单位抗体 FNTB
RSPH3蛋白抗体 RSPH3 SH3BGRL2蛋白抗体 SH3BGRL2
钾离子通道蛋白家族KCNQ1抗体 KCNQ1 卷曲螺旋结构域蛋白114抗体 CCDC114通用型副伤A（Salmonella Paratyphi A）定性基因检测试剂盒 小鼠β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)elisa检测试剂盒
人丙二醛(MDA)elisa分析检测试剂盒 MDAELISAKit
冰冻切片组织P35蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 大鼠整合素α2(ITGA2)elisa检测试剂盒
人EB病毒核抗原1(EBNA1)抗体(IgG)elisa分析检测试剂盒 组织CaM KII激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
小鼠趋化因子(fractalkine/CX3CL1)elisa检测试剂盒 大鼠核受体亚家族1D组成员2(NR1D2)elisa检测试剂盒
MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 500T 小鼠过敏/补体片断4a(C4a)elisa检测试剂盒
GBC-SD 人胆囊癌细胞微量琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 50次 石蜡切片结缔组织（CONNECTIVE TISSUE）摩罗利 （mallory）染色试剂盒
鱼白介素8(IL-8/CXCL8)elisa分析检测试剂盒 IL-8 ELISA Kit
细胞传代培养操作步骤：
（1）当显微镜下细胞形态和生长密度达到90%时，进行传代。
（2）吸弃培养液。添加PBS清洗1~2次，摇匀后弃掉。
（3）加入覆盖瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培养瓶放入37℃培养箱进行消化，3min左右拿出，用显微镜观察细胞有无超过80%的量，发生收缩变圆、细胞间隙变大。轻轻拍打培养瓶使剩余细胞 脱落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均匀，避免消化过度。
（5）细胞悬液吸至离心管内，1000rpm/min离心3~5min。
（6）吸弃上清，加入培养液重悬细胞，吹打细胞使其均匀分散。
（7）吸弃细胞悬液，选择适合的密度接种到新培养瓶中，补充培养液并摇匀，放置37℃的CO2培养箱进行培养。
（8）根据细胞生长状态确定换液或传代时间。
（9）细胞冻存。
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