细胞培养操作：
1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。24-48h后换液。
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂终止消化。
c、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加1-2mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。
3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
商品属性：
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产品名称
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J774A.1小鼠单核巨噬细胞
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英文名称
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J774A.1:J774A1
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产品货号
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A01X1063
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培养条件
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气相：空气，95%；CO2，5%
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生长特性
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贴壁细胞，不用胰酶消化
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细胞形态
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单核细胞、巨噬细胞样
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产品种属
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小鼠
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冻存条件
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冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
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组织来源
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巨噬细胞
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用途
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仅供科研研究实验
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商品详情：
生长特性 贴壁细胞，不用yi酶消化
细胞形态 单核细胞、巨噬细胞样
生长培养基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
推荐传代比例 1:3-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
注意事项 1、该细胞不建议使用yi酶消化，yi酶会刺激分化； 2、 超过3天不传代细胞容易分化； 3、 培养时，存在少量分化细胞，属于正常现象。
背景描述 J774A.1细胞来源于BABL/cN小鼠，有抗体依赖的吞噬作用，生长受硫酸葡聚糖、PPD和LPS的抑制；J774A.1细胞可产生IL-1β和大量的溶jun酶。
年龄（性别） 成年
组织来源 巨噬细胞
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 肉瘤细胞
生物等级 1
倍增时间 ~17 hours
受体表达情况 Complement (C3), expressed;Fc receptor, IgG, high affinity I (Fcgr1), expressed
保藏机构 ATCC; TIB-67 DSMZ; ACC-170 ECACC; 91051511
公司正在出售的产品：
FBG4蛋白抗体 FBG4 FITC标记人CD58单克隆抗体 human CD58/FITC
嗅觉受体9G9抗体 OR9G9 血小板源性生长因子A相关蛋白2抗体 TUSC2
慢性粒细胞白血病相关蛋白抗体 KBTBD11 膜转运蛋白XK抗体 XKR1
髓样细胞白血病-1抗体 MCL1 天青素/肝素结合蛋白单克隆抗体 Azurocidin/HBP
21号染色体开放阅读框56抗体 SPATC1L 5号染色体开放阅读框19抗体 C5orf19
蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型20抗体 PTPN20 第12号染色体开放阅读框23抗体 C12orf23
PXK蛋白抗体 PXK RAS家族关联结构域蛋白9抗体 PAMCI/RASF9
肌微管素相关蛋白10抗体 MTMR10 碱性成纤维细胞生长因子受体1（CD331）单克隆抗体 FGFR1细胞N-乙酰转移酶（NAT）活性比色法定量检测试剂盒 小鼠10kDa干扰素γ诱导蛋白(IP-10)elisa检测试剂盒
人二氢嘧啶酶样2(DPYSL2)elisa分析检测试剂盒 DPYSL2ELISAKit
冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）原位荧光染色试剂盒（羟自由基） 大鼠纤维蛋白肽A(FPA)elisa检测试剂盒
牛elisa检测试剂盒 植物胱硫醚-γ-合成酶（cystathionine γ-synthase；CGS）活性荧光定量检测试剂盒
小鼠抗胰蛋白酶(AT)elisa分析检测试剂盒 大鼠叠氮胸苷(AZT)elisa检测试剂盒
植物甲基化组蛋白H3-K9染色质沉淀分析（CHIP）试剂盒 小鼠促性腺释放(GnRH)elisa检测试剂盒
J774A.1小鼠单核巨噬细胞脯氨酸（PRO）含量测试盒 （无一抗和二抗）
猴催乳素(PRL/LTH)elisa分析检测试剂盒 PRL/LTH ELISA Kit
细胞传代培养操作步骤：
（1）当显微镜下细胞形态和生长密度达到90%时，进行传代。
（2）吸弃培养液。添加PBS清洗1~2次，摇匀后弃掉。
（3）加入覆盖瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培养瓶放入37℃培养箱进行消化，3min左右拿出，用显微镜观察细胞有无超过80%的量，发生收缩变圆、细胞间隙变大。轻轻拍打培养瓶使剩余细胞 脱落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均匀，避免消化过度。
（5）细胞悬液吸至离心管内，1000rpm/min离心3~5min。
（6）吸弃上清，加入培养液重悬细胞，吹打细胞使其均匀分散。
（7）吸弃细胞悬液，选择适合的密度接种到新培养瓶中，补充培养液并摇匀，放置37℃的CO2培养箱进行培养。
（8）根据细胞生长状态确定换液或传代时间。
（9）细胞冻存。
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