细胞培养操作：
1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。24-48h后换液。
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂终止消化。
c、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加1-2mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。
3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
商品属性：
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产品名称
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NCI-H1299人非小细胞肺癌细胞
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英文名称
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NCI-H1299:NCIH1299
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产品货号
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A01X871
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培养条件
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气相：空气，95%；CO2，5%
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生长特性
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贴壁细胞
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细胞形态
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上皮细胞样
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产品种属
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人
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冻存条件
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冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
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组织来源
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肺癌：非小细胞肺癌；转移灶：结
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用途
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仅供科研研究实验
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商品详情：
生长特性 贴壁细胞
细胞形态 上皮细胞样
生长培养基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
推荐传代比例 1:3-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
背景描述 NCI-H1299细胞来源于一个结转移，患者接受了初期放疗。NCI-H1299细胞均一性的部分缺失p53蛋白，并缺少p53蛋白表达。NCI-H1299细胞可以合成0.1pmol/毫克蛋白的NMB蛋白，而不合成促胃液释放肽(GRP)。
年龄（性别） 男；43岁
组织来源 肺癌：非小细胞肺癌；转移灶：结
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 肺癌细胞
生物等级 1
倍增时间 ~30 hours
基因表达情况 These cells stain positive
for keratin and vimentin but are negative for neurofilament triplet protein.
neuromedin B, The cells have a homozygous partial deletion of the p53 protein,
and lack expression of p53 protein. The cells produce neuromedin B.
保藏机构 ATCC; CRL-5803
公司正在出售的产品：
TOMM40L 线粒体核糖体蛋白L39
DNA结合蛋白Mel18抗体 Mel18
含缬酪肽蛋白抗体 Anti-VCP TOMM40L蛋白抗体
选择性胸腺细胞相关蛋白抗体 Anti-THEMIS 环指蛋白135抗体 Anti-RNF135
沉默调节蛋白5抗体 Anti-SIRT5 骨保护蛋白/护骨素抗体 Anti-OPG
DNAJC13蛋白抗体 DNAJC13
突触细胞粘附分子3抗体 Anti-Neuroligin 3 MrpL39
PSP抗体 Anti-Persephin 细胞粘附分子1抗体 Anti-SynCAM/TSLC1丙肝病毒NS5A反转录蛋白8抗体 HCV NS5A transactivated protein 8
CDK6蛋白表达西方杂交分析试剂盒 己糖激酶HK测试盒 48样 紫外比色法
人IgM英文别名： human Immunoglobulin M; IgM from human serum; Human IgM Purified; Human IgM
Protein (Native). Human IgM
大鼠环磷酸鸟苷(cGMP)elisa生化检测试剂盒 cGMP ELISA Kit
兔基质金属蛋白酶1(MMP-1)elisa生化检测试剂盒 MMP-1ELISAkit
E3泛素蛋白连接酶144B/环指蛋白144B抗体 IBRDC2
NCI-H1299人非小细胞肺癌细胞桥连整合因子蛋白抗体 BIN1
小鼠ⅩⅤ型胶原(COL15)elisa检测试剂盒 酚氯仿法DNA萃取试剂盒
细胞传代培养操作步骤：
（1）当显微镜下细胞形态和生长密度达到90%时，进行传代。
（2）吸弃培养液。添加PBS清洗1~2次，摇匀后弃掉。
（3）加入覆盖瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培养瓶放入37℃培养箱进行消化，3min左右拿出，用显微镜观察细胞有无超过80%的量，发生收缩变圆、细胞间隙变大。轻轻拍打培养瓶使剩余细胞 脱落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均匀，避免消化过度。
（5）细胞悬液吸至离心管内，1000rpm/min离心3~5min。
（6）吸弃上清，加入培养液重悬细胞，吹打细胞使其均匀分散。
（7）吸弃细胞悬液，选择适合的密度接种到新培养瓶中，补充培养液并摇匀，放置37℃的CO2培养箱进行培养。
（8）根据细胞生长状态确定换液或传代时间。
（9）细胞冻存。
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