人肥大细胞；HMC-1

商品详情：

细胞别称；HMC1; HMC-1; 人肥大细胞

种属来源；人

年龄性别；52岁，男

组织来源；外周血

生长特性；悬浮生长

细胞形态；母细胞样

细胞代数；10代以内

背景简介；来源于一名 52 岁男性肥大细胞白血病患者的外周血样本。该细胞有多重亚型分别为：HMC-1 5C6，HMC-1.1 ，HMC-1.2 。广泛用于人肥大细胞功能研究，因为它们表现出组织肥大细胞的许多关键特征，例如组胺、类胰蛋白酶、肝素和类似细胞表面抗原谱的表达 (1,2)。受体酪氨酸激酶 KIT 在肥大细胞上表达，在肥大细胞的增殖、功能和存活中起重要作用。KIT 中的激活突变与肥大细胞生长失调有关，并与肥大细胞肿瘤和系统性肥大细胞增多症有关。据报道，HMC-1 细胞系中存在两个 KIT 激活点突变 。这两种突变都将受体转化为组成型酪氨酸磷酸化和活性状态，导致生长因子非依赖性增殖。HMC-1.1 (HMC-1(560)) 和 HMC-1.2 (HMC-1(560,816)) 是HMC-1 细胞系的两个变异亚系。HMC-1.1 具有 V560G 突变，但不具有 D816V 突变。HMC-1.2 同时具有 V560G 和D816V 突变，并且表现出比 HMC-1.1 更高的增殖率。有人认为，HMC-1.2 的较高增殖潜力可能归因于 D816V 突变。

STR位点；AmelogeninX：CSF1PO：10,13;D2S1338：17,25;D3S1358：15;D5S818：12,13;D7S820：10,11;D8S1179：12 ;D13S317：10,11;D16S539：10,12;D18S51：14,20;D19S433：14;D21S11：29;FGA：18,20;Penta D：11;Penta ：E9,19;TH01：7,9.3;TPOX：8,11;vWA：17,19

细胞规格；1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装

支原体检测；无

保藏机构；DSMZ；ACC-283 - Discontinued

培养基；IMDM+10%FBS+1%PS

培养条件；气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

冻存条件；无血清冻存液，液氮储存

细胞培养操作：

1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。24-48h后换液。 
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂终止消化。
c、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加1-2mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。 
3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

细胞传代培养操作步骤：
（1）当显微镜下细胞形态和生长密度达到90%时，进行传代。
（2）吸弃培养液。添加PBS清洗1~2次，摇匀后弃掉。
（3）加入覆盖瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培养瓶放入37℃培养箱进行消化，3min左右拿出，用显微镜观察细胞有无超过80%的量，发生收缩变圆、细胞间隙变大。轻轻拍打培养瓶使剩余细胞 脱落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均匀，避免消化过度。
（5）细胞悬液吸至离心管内，1000rpm/min离心3~5min。
（6）吸弃上清，加入培养液重悬细胞，吹打细胞使其均匀分散。
（7）吸弃细胞悬液，选择适合的密度接种到新培养瓶中，补充培养液并摇匀，放置37℃的CO2培养箱进行培养。
（8）根据细胞生长状态确定换液或传代时间。
（9）细胞冻存。
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