商品属性:
产品名称
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人肝癌细胞;SK-HEP-1-luc-EGFP
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英文名称
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SK-HEP-1-LUC-EGFP
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产品货号
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AXB10717
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培养条件
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气相:95%空气+5%二氧化碳;
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生长特性
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贴壁生长
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细胞形态
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上皮细胞样
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产品种属
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人
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冻存条件
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详见说明
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组织来源
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肝脏
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用途
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仅供科研研究实验
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商品详情:
细胞别称;SK-HEP-1-LUC-EGFP;人肝癌细胞-荧光素酶标记-绿色荧光蛋白;人肝癌细胞-LUC-EGFP
种属来源;人
年龄性别;男,52岁
组织来源;肝脏
生长特性;贴壁生长
细胞形态;上皮细胞样
puro药筛浓度;SK-HEP-1-LUC-EGFP细胞puro药筛浓度为1.0ug/ml,培养过程中建议使用0.5ug/ml浓度puro维持
细胞代数;10代以内
背景简介;SK-HEP-1细胞已被鉴定为内皮来源。SK-HEP-1细胞为异倍体女性人(XX),染色体在亚三倍体范围内。在裸鼠中,SK-HEP-1细胞能形成与肝癌相一致的大细胞癌。Luciferase SK-HEP-1细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。该细胞株性状稳定,培养时不需要添加维持。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照,也可用于活体动物成像实验。SK-HEP-1细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc和EGFP基因。
STR位点;Amelogenin:X;CSF1PO:11,12;D13S317:8,12;D16S539:12;D18S51:13,15;D21S11:29,31;D3S1358:15,16;D5S818:10,13;D7S820:8,11;D8S1179:13,14;FGA:17;PentaD:13,14;PentaE:13,21;TH01:7,9;TPOX:9;vWA:14,17
生物等级;1
细胞规格;1×106cells/T25或1mL冻存管
支原体检测;无
培养基;DMEM+10%FBS+PS+1. 0ug/ml puro
培养条件;气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
细胞培养操作:
1) 复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养,补加培养基至6ml。24-48h后换液。
2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1ml消化液(0.25%Trypsin)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂终止消化。
c、轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,加1-2mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:3到1:4比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。
3) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
细胞传代培养操作步骤:
(1)当显微镜下细胞形态和生长密度达到90%时,进行传代。
(2)吸弃培养液。添加PBS清洗1~2次,摇匀后弃掉。
(3)加入覆盖瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
(4)培养瓶放入37℃培养箱进行消化,3min左右拿出,用显微镜观察细胞有无超过80%的量,发生收缩变圆、细胞间隙变大。轻轻拍打培养瓶使剩余细胞 脱落,加入2倍量的胰蛋白酶中止消化,并吹打均匀,避免消化过度。
(5)细胞悬液吸至离心管内,1000rpm/min离心3~5min。
(6)吸弃上清,加入培养液重悬细胞,吹打细胞使其均匀分散。
(7)吸弃细胞悬液,选择适合的密度接种到新培养瓶中,补充培养液并摇匀,放置37℃的CO2培养箱进行培养。
(8)根据细胞生长状态确定换液或传代时间。
(9)细胞冻存。
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